研究背景:糖尿病心肌病（Diabetic cardiomyopathy,DCM）是糖尿病患者的重要的慢性心血管并发症,是由于糖尿病状态下糖、脂代谢障碍导致的心肌组织代谢紊乱,引起心肌肥大和间质纤维化等改变,最终发展为充血性心力衰竭,对人类的健康构成了严重威胁。DCM的发病机制十分复杂,随着研究的不断深入,多个因素、多个环节被证实参与了DCM的发生发展过程。DCM的治疗目前无特效药物,而天然药物的研究可能会为其治疗提供新的方向。葡萄多酚（Grape polyphenol,GP）是葡萄中提取的酚类物质,主要包括原花青素和白藜芦醇等,是一种天然的抗氧化剂和自由基清除剂,具有抗动脉硬化和心血管保护作用,但其机制不是很清楚。近年来,随着科技的发展和网络药理学研究的不断深入,药物和疾病之间的分子关联规律逐步被揭示。我们依据网络药理学方法,通过构建活性成分-靶点-疾病网络,在分子水平上系统分析GP主要活性成分抗DCM的关键作用靶点并探讨其可能的作用机制,进一步在细胞、动物水平进行验证,从而揭示GP抗糖尿病心肌病的分子机制,为临床上天然药物防治糖尿病心肌病提供理论基础。研究目的:1.基于网络药理学研究葡萄多酚抗糖尿病心肌病的作用靶点和分子机制。2.探讨GP主要活性成分对大鼠心肌细胞（H9c2）高糖损伤的保护作用及机制研究。3.研究GP对糖尿病小鼠心肌损伤的保护机制及靶点验证。研究方法:1.通过PubMed和万方数据库检索查阅文献收集葡萄多酚的有效活性成分,并应用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）获取葡萄多酚的作用靶点;通过GeneCards和NCBI数据库检索糖尿病心肌病相关靶点基因。应用Cytoscape3.7.1软件分析构建活性成分-靶点-疾病网络,深入分析蛋白相互作用（PPI）和京都基因与基因组百科全书通路（KEGG）富集,确定GP抗糖尿病心肌病的核心靶点和信号通路。2.建立大鼠H9c2细胞高糖损伤模型,分别用7种不同浓度的葡萄多酚主要活性成分进行干预,采用CCK-8法检测H9c2细胞存活率和免疫印迹法检测相关蛋白的表达。3.雄性SAMP8小鼠采用链脲佐菌素（50mg/kg/d）腹腔注射构建糖尿病模型,给予GP干预8周,测定各组小鼠空腹血糖、体重及心脏重量,通过HE染色和Masson染色观察各组小鼠心肌组织病理学变化,通过免疫印迹法检测MMP9、IGF1R、TGF-β1、Nrf2等蛋白的表达。研究结果:1.确定了葡萄多酚23种主要活性成分的候选靶点和糖尿病心肌病相关靶点,GP通过AKT、TP53、STAT3、MMP9、IGF1R、Nrf2、TGF-β1 等关键靶点调控 MAPK、VEGF、NOD样受体等信号通路方式来发挥抗糖尿病心肌病的作用。2.葡萄多酚主要活性成分可改善大鼠H9c2细胞的高糖损伤。细胞受到高糖损伤后,MMP9、IGF1R、TGF-β1蛋白表达显著增加,Nrf2蛋白表达显著减少,给予活性成分干预后,细胞存活率显著增加,同时可显著减少MMP9、IGF1R、TGF-β1蛋白表达,增加Nrf2蛋白表达。3.糖尿病小鼠GP干预8周后,可显著增加糖尿病小鼠的体重,改善其心肌纤维化。糖尿病小鼠心肌组织MMP9、IGF1R、TGF-β1蛋白表达显著增加,Nrf2蛋白表达显著减少。GP干预后能够显著抑制MMP9、IGF1R、TGF-β1蛋白表达,并增加Nrf2蛋白表达。结论:1.基于网络药理学研究发现,葡萄多酚具有多种活性成分,通过多个作用靶点、多条信号转导通路的有机整合,达到抗糖尿病心肌病的整体效应。2.葡萄多酚的主要活性成分对H9c2细胞高糖损伤均具有不同程度的保护作用,其可能机制与调节Nrf2、IGF1R、MMP9和TGF-β1蛋白表达有关。3.葡萄多酚能够显著减轻糖尿病小鼠心肌纤维化,通过增加Nrf2蛋白表达,减少MMP9、TGF-β1和IGF1R蛋白表达,起到抗氧化、抗纤维化的作用,为糖尿病心肌病的防治提供新的治疗途径,为天然药物临床应用提供理论基础。