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目的:本实验应用SYBR GREEN实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,q PCR)检测根尖周炎患者根管中的牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)数量,采用限制性片段长度多态性分析的方法确定P.gingivalis kgp基因型。探讨根尖周炎患者根管中P.gingivalis数量与临床症状的关系,及P.gingivalis kgp基因型与临床症状的关系,从而初探P.gingivalis在根尖周炎患者根管中的定植情况。方法:本实验包括三部分第一部分:培养P.gingivalis标准菌株,提取P.gingivalis标准菌株细菌基因组DNA,应用PCR扩增P.gingivalis基因组DNA中Arg-gingpain基因上的一段单拷贝基因,并将目的基因片段连接到p MD18-T载体上,进行质粒酶切及测序验证。第二部分:收集43例根尖周炎患者根管内细菌样本,提取细菌样本的细菌基因组DNA,利用q PCR检测样本中的P.gingivalis数量,分析和比较根尖周炎患者根管中的P.gingivalis检出率及检出量与临床症状的关系。第三部分:采用PCR法从样本细菌基因组DNA中扩增编码P.gingivalis kgp催化域的基因片段,通过限制性内切酶MseⅠ酶切P.gingivalis kgp催化域的基因片段,从而确定P.gingivalis kgp基因型,比较P.gingivalis kgp基因型与根尖周炎患者临床症状的关系。结果:1、经酶切及测序验证,本实验成功构建了含有P.gingivalis Arg-gingpain单拷贝基因的重组质粒,得到q PCR的标准品。2、在本实验采集的43例根尖周炎患者的根管样本中,其中27例样本检出P.gingivalis,P.gingivalis检出率为62.8%。P.gingivalis在自发痛组、肿胀组中的检出率为70.4%、75%,分别高于无自发痛组(50%)、无肿胀组(55.6%),但均无统计学差异(P>0.05)。叩痛组与无叩痛组、窦道组(无溢脓)与无窦道组中的P.gingivalis检出率差异无统计学意义(P>0.05)。相关性分析显示,P.gingivalis检出率与根尖周炎的自发痛、叩痛、窦道(无溢脓)、肿胀亦无相关性。3、自发痛组与无自发痛组、叩痛组与无叩痛组、窦道组(无溢脓)与无窦道组、肿胀组与无肿胀组中的P.gingivalis检出量(对数值)差异均无统计学意义(P>0.05)。4、自发痛组与无自发痛组中kgp基因型分布不同,其中自发痛组中的P.gingivalis以kgpⅠ为主,差异有统计学意义(P<0.05)。叩痛组与无叩痛组、窦道组(无溢脓)与无窦道组、肿胀组与无肿胀组中kgp基因型分布无明显差异(P>0.05)。结论:1、q PCR可用于定量检测牙髓及根尖周病病原微生物。2、根尖周炎患者根管中P.gingivalis检出率、检出量与临床症状(自发痛、叩痛、无溢脓型窦道、肿胀)无明显相关性。3、根尖周炎患者根管中的P.gingivalis kgp基因存在基因多态性,并且自发痛组中的P.gingivalis以kgpⅠ基因型为主。