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背景和目的:骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)是好发于儿童和青少年的原发性恶性骨肿瘤,占所有儿童癌症的3.4%左右。全球范围内总体发病率约3.4/100万。青春期骨骼生长快速,是骨肉瘤的发病峰值年龄。同时,骨肉瘤好发于四肢的长骨,尤其是长骨干骺端。骨肉瘤是一种典型的高级别梭形肿瘤,伴有产生类骨质的恶性细胞。手术治疗联合化疗仍是骨肉瘤病人的传统治疗方法。甲氨蝶呤、顺铂、阿霉素和异环磷酰胺是化疗的首选药物,而依托泊苷则是转移性疾病患者的首选药物。尽管过去十年间,骨肉瘤的诊断和治疗取得了极大的进展,但是有60-70%的骨肉瘤患者显示治疗前后未能延长患者的生存周期。局限性肿瘤患者5年生存率约50%,而伴随肺部远处转移的患者5年生存率只有15%左右。EMT是胚胎发育和癌症进展中细胞可塑性的一个突出例子,是上皮细胞向间质细胞转化获得间质特征的过程。EMT过程被认为与细胞减缓凋亡,增强侵袭性有关。目前,骨肉瘤的临床工作中亟需寻求新的有效的治疗方法。天然化合物研究作为近年来一个热门领域,可以为骨肉瘤的早期诊断和治疗提供新的思路和途径。方法:在本次研究中,研究对象选择人骨肉瘤细胞系U2OS和143B细胞系。通过CCK-8监测药物毒性、细胞集落实验探究药物对骨肉瘤细增殖的作用。选择划痕愈合实验、Transwell板迁移和侵袭试验探索甘草查尔酮A对人骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。利用Hoechst33342特殊染液和细胞流式仪Annexin V/PI染色法检测甘草查尔酮A对人骨肉瘤细胞凋亡的作用。使用蛋白免疫印迹实验(Western blot)分别检测EMT相关蛋白的表达和Wnt/β-catenin信号通路的激活与抑制。另外,我们选择BALB/cnu/nu裸鼠用于体内荷瘤实验,选择皮下注射一定浓度的143B细胞模拟骨肉瘤肿瘤模型,进行体内实验探究甘草查尔酮A对骨肉瘤组织的生长影响情况。结果:CCK-8实验结果通过软件分析可以观察到,甘草查尔酮A对两种骨肉瘤细胞系(U2OS和143B)两均有细胞毒性,明显抑制细胞活性,且与对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05);观察细胞集落实验,显微镜下计数含有50个及以上数目的细胞集落,结果显示甘草查尔酮A处理组,细胞集落形成明显受到抑制,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);细胞划痕实验和Transwell迁移和Transwell侵袭实验显示:和对照组细胞比较,甘草查尔酮A处理组细胞迁移能力明显下降,侵袭细胞数明显减少。细胞流式仪Annexin V/PI染色统计分析,药物处理组细胞凋亡数明显高于对照组(P<0.05);Western blot检测,发现甘草查尔酮A处理后骨肉瘤细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下调,相反凋亡标记蛋白Caspase3表达显著上升。EMT过程上皮标记物E-cadherin表达上调,而间质标记物N-cadherin、Snail及Slug等相关蛋白表达被抑制,表明EMT过程被明显抑制。Wnt/β-catenin信号通路内关键蛋白分子β-catenin及C-jun表达明显下调,表明Wnt/β-catenin信号通路也被抑制。同样,Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理细胞后,上皮标记物表达上升,间质标记物表达下调,EMT过程被抑制。最后,裸鼠成瘤模型显示:甘草查尔酮能够在裸鼠体内肿瘤模型中抑制骨肉瘤的生长。结论:甘草查尔酮A可以减弱细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡,并且通过抑制Wnt/β-catenin信号通路进而阻断EMT过程抑制人骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。最终,抑制骨肉瘤在体内的生长并且减少远处转移的发生。