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目的:阐明肿瘤坏死因子α诱导蛋白 8样蛋白 3(tumor necrosis factor-alpha-induced protein 8-like 3,TIPE3)通过生促红素人肝细胞 A2(erythropoietin-producing human hepatocelluar A 2,EphA2)促进结直肠癌生长和转移的作用及其机制。方法:(1)提取人正常肠粘膜上皮细胞NCM460(用作对照)和结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞 HT29、RKO、LOVO、SW480、SW620 的总蛋白,通过 Western Blot检测CRC细胞中TIPE3的表达水平。(2)构建TIPE3过表达慢病毒质粒(课题组已构建)、敲除慢病毒质粒,分别包装为TIPE3过表达、敲除慢病毒,并滴度测定。(3)用上述病毒感染结直肠癌细胞SW480,构建TIPE3稳定过表达、敲除细胞系,并通过CCK8、平板克隆、划痕、Transwell迁移、侵袭等细胞功能实验,研究TIPE3过表达、敲除对CRC细胞生长增殖、迁移和侵袭的影响。(4)通过Western Blot检测过表达、敲除细胞中TIPE3对c-Myc、EphA2的影响,并通过RT-qPCR检测细胞中EphA2的mRNA水平,进一步通过EphA2流式抗体染色检测TIPE3过表达细胞SW480-TIPE3中EphA2的表达水平。(5)向TIPE3过表达细胞SW480-TIPE3中转染c-Myc siRNA及其对照,检测其转染效率并探究敲减c-Myc对细胞中EphA2的影响。(6)通过EphA2流式抗体染色和CCLE数据库分析EphA2在CRC细胞中的表达趋势。(7)向TIPE3过表达细胞SW480-TIPE3中转染EphA2 siRNA及其对照,检测其转染效率并探究敲减EphA2能否削弱TIPE3对结直肠癌的促进作用。结果:(1)与正常肠粘膜上皮细胞NCM460相比,TIPE3在人CRC细胞中高表达。(2)成功构建TIPE3过表达、敲除慢病毒。(3)TIPE3过表达促进CRC细胞SW480的体外生长增殖、迁移和侵袭;而TIPE3敲除则可抑制其体外生长增殖、迁移和侵袭。(4)过表达TIPE3可明显增加细胞中c-Myc、EphA2的表达,而敲除TIPE3可观察到细胞中c-Myc、EphA2的表达量随之降低。(5)成功对SW480-TIPE3细胞中的c-Myc进行干扰,与control siRNA干扰SW480-TIPE3对照细胞相比,c-Myc siRNA干扰SW480-TIPE3细胞中EphA2表达下调。(6)流式抗体染色发现EphA2在CRC细胞中高表达,且趋势与CCLE数据库中的结果基本一致。(7)成功对SW480-TIPE3 中的 EphA2 进行干扰,与 control siRNA 干扰 SW480-TIPE3 对照细胞相比,EphA2 siRNA干扰SW480-TIPE3细胞的生长和转移受到明显抑制。结论:TIPE3在人结直肠癌细胞中表达升高,并且可促进CRC细胞的生长和转移。TIPE3通过c-Myc引起细胞中EphA2的上调是介导TIPE3促进CRC细胞生长和转移过程中至关重要的环节。