目的 骨骼肌特异性敲除Sidt2基因小鼠表型、相关机制研究及丙二酸血症临床诊治分析方法 （1）以Sidt2^f/fCre（-）小鼠与Sidt2^f/fCre（+/-）小鼠杂交获得Sidt2^f/fCre（+/-）模型小鼠即Sidt2^f/fCre和Sidt2^f/fCre（-）对照小鼠即Sidt2^f/f。提取小鼠尾尖DNA,PCR鉴定小鼠基因型。（2）比较两组小鼠的大体形态及体重有无差异。比较两组小鼠骨骼肌形态有无差异,并称重。分析血清CK活性。对2月龄模型鼠和对照鼠的骨骼肌组织冰冻切片HE染色及组织化学染色,以观察有无病理形态变化。（3）Western blot及免疫荧光检测骨骼肌特异性敲除Sidt2基因小鼠自噬相关蛋白p62、LC3、Lamp2及Ubiquitin表达情况,测定骨骼肌组织溶酶体酶活性。（4）对门诊的1例丙二酸血症患儿MLYCD基因直接测序,父母验证,不同氨基酸同源性分析等排除多态性。定量PCR验证基因芯片结果。（5）对患儿给予规范化治疗,随访临床转归。结果 DNA水平鉴定出模型小鼠及对照小鼠用于后续的实验研究;骨骼肌特异性敲除Sidt2基因小鼠体重,从出生后2周到24周较对照组无明显变化;8周龄模型小鼠腓肠肌、比目鱼肌的绝对重量和对照组无明显变化,胫骨前肌绝对重量较对照组降低,而模型小鼠腓肠肌、比目鱼肌、胫骨前肌的相对重量较对照组无明显变化。1月龄模型小鼠血清CK活性较对照组升高,而2月龄无明显变化;骨骼肌冰冻切片HE染色显示,2月龄模型小鼠病理改变为肌纤维结构紊乱,肌纤维大小不一,出现大量的中央核肌纤维,部分肌纤维内可见颗粒状物质沉积,肌纤维周围还可见炎症细胞浸润。PAS、ORO染色阴性。ACP、α-GPD、NADH、AMP染色阳性;WB结果显示Beclin1表达无变化。p62、Ubiquitin、Lamp2及LC3Ⅱ表达上调。免疫荧光结果显示模型小鼠p62与Lamp2表达上调并部分共定位,p62与Ubiquitin表达上调并共定位。模型组小鼠溶酶体酶活性正常。该患儿MLYCD基因E4存在一个新的杂合突变（c.911G>A,p.G304E）和一个16q23.3上57Kbp单拷贝大片段缺失,该缺失包括MLYCD基因前三个外显子,并且错义突变位点氨基酸高度保守。患儿定量PCR结果与基因芯片结果一致。该患儿接受规范治疗后一个半月尿液中丙二酸较以前降低而血中丙二酰肉碱较以前轻微升高,治疗后半年随访尿中丙二酸未检测到而血中丙二酰肉碱较以前无明显变化,患儿的精神状态也有改善。结论 成功繁殖出骨骼肌特异性敲除Sidt2基因小鼠以满足后续实验需要。模型小鼠血清CK升高,肌纤维结构紊乱,大量中央核肌纤维等骨骼肌损伤表型,这一表型是通过影响自噬途径引起;发现一例丙二酸血症患儿,其携带一个父源的杂合突变及母源的大片段缺失。对患儿进行规范化治疗,其临床症状改善。