目的:通过基因组学测序、蛋白组学测序与临床组织表达检测筛选下咽癌淋巴转移差异基因,结合临床统计资料分析差异基因对患者预后的影响,通过慢病毒转染后的细胞功能实验及裸鼠足垫成瘤模型探究差异基因在淋巴转移过程中发挥的作用及其可能作用的机制。方法:送检下咽癌淋巴转移及未转移患者肿瘤组织行基因组学、蛋白组学测序,结合GEO数据库筛选淋巴转移差异基因。扩大样本量行RT-PCR、Western blot、免疫组化验证差异基因表达。统计下咽癌患者临床病理特征,通过Kaplan-Meier生存分析及COX单因素、多因素回归检验分析差异基因与下咽癌预后的关系。构建下咽癌Fa Du细胞株,慢病毒转染敲减和过表达差异基因,RT-PCR、Western blot验证不同细胞株中差异基因表达情况,流式细胞术、划痕实验、Transwell侵袭实验检验差异基因对细胞功能,尤其是侵袭、迁移功能的影响。构建裸鼠足垫成瘤模型,移植下咽癌细胞,观察肿瘤生长状况,同时行RT-PCR、Western blot及免疫组化实验检验差异基因的表达对肿瘤原发灶发生发展和腘窝淋巴转移的影响。结果:送检11例临床组织行基因、蛋白组学测序,结合GEO人头颈鳞癌数据库结果,筛选出337个差异基因,其中表达上调组144个,下调组193个。通过12对新鲜临床标本RT-PCR、Western blot检测,及107例标本免疫组化检测,进一步筛选差异基因,确定表达差异显著的上调基因RAF1,结合临床病理特征数据行Kaplan-Meier生存分析及COX回归检验分析,发现RAF1的高表达是下咽癌患者预后的独立危险因素。通过构建下咽癌Fa Du细胞株,同时慢病毒转染敲低和过表达RAF1并构建稳转细胞株,流式细胞术、划痕实验、Transwell侵袭实验结果提示RAF1的高表达明显促进肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力并抑制肿瘤细胞的凋亡。通过构建裸鼠足垫成瘤模型,移植下咽癌野生型Fa Du细胞株及RAF1敲低稳转细胞株,测量足垫原发灶及腘窝转移灶肿瘤重量、体积,同时RT-PCR、Western blot及免疫组化结果提示RAF1表达上调会促进肿瘤生长和淋巴转移。结论:通过多组学测序结合数据库分析,我们发现下咽癌淋巴转移差异基因RAF1是临床患者预后的独立危险因素,其表达上调与下咽癌肿瘤发生发展、迁移侵袭和淋巴转移密切相关。这提示RAF1可作为一个重要的潜在生物标志物用于早期筛查和诊断下咽癌淋巴转移,同时对下咽癌淋巴转移患者的治疗和预后改善提供新的方向。