论文部分内容阅读
研究目的:慢性肾衰竭（chronic renal failure,CRF）是各种慢性肾脏病发展至终末期的归宿,其最常见的病理特征为肾间质纤维化。本实验通过对大鼠进行连续腺嘌呤灌胃造慢性肾衰竭模型,并观察肾衰降浊方对腺嘌呤大鼠模型肾组织的影响。检测给药14天后大鼠体重、肾重指数、血清肌酐、尿素氮、24小时尿蛋白定量、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肾脏病理、肾脏组织中的Wnt/β-catenin信号通路及相关蛋白表达和m RNA的表达。以Wnt/β-catenin信号通路为基础,观察肾衰降浊方不同剂量对腺嘌呤大鼠肾组织的影响,探究肾衰降浊方抗纤维化的作用。研究方法:将60只健康雄性Wistar大鼠随机分为:空白组、模型组、西药组、中药低、中、高剂量组6组,每组各10只。除空白组外的5组大鼠给予连续腺嘌呤（浓度为30mg/m L）灌胃3周,空白组灌服等容积生理盐水,一次200mg/kg。造模成功后,分别对各组大鼠进行灌胃治疗,空白组和模型组予生理盐水2ml/天,西药组予0.046g/ml的氯沙坦钾溶液2ml/天,中药低中高组分别予溶度为0.048g/m L、0.096g/m L、0.192g/m L的肾衰降浊方2ml/天,每日一次,持续给药14天。治疗14天后,各组大鼠收集血清及24h尿,可检测BUN、Scr、24h尿蛋白定量、ALT、AST等生化指标。切除左侧肾脏,称重后将肾组织切分,一部分用于病理检测,另一部分用于后期Western Blot及RT-PCR检测。研究结果:1.对大鼠一般情况及生化指标的影响腺嘌呤灌胃后大鼠出现不同程度的摄食减少、对外界刺激反应灵敏度降低、体重减轻、活动自如度下降,精神日渐萎靡、皮毛枯槁稀松脱落。给药治疗后,各个给药组大鼠的体重增加速度比空白组低,血清尿素氮、肌酐都有一定的上升。实验最终研究结果显示,空白组大鼠各项指标良好,模型组各项指标最差,给药组各项指标中药高剂量组、西药组＞中药中剂量组＞中药低剂量组。从大鼠体重来看,各组大鼠体重均有增长,在腺嘌呤灌胃期间大鼠体重较空白组大鼠增长缓慢,给药治疗期间,空白组大鼠体重增长最快,模型组最慢。给药治疗14天时,跟模型组相比,中药高、中、低剂量组和西药组差异均有统计学意义。说明药物治疗起效,且中药高剂量组和西药组疗效最显著。生化指标:在腺嘌呤灌胃后,除空白组外其余各组检测到血清尿素氮、肌酐指标升高。给药治疗14天后,各个给药组跟模型组相比,两个指标值均有下降,中药低剂量组下降效果不明显,中药高剂量组跟西药组有显著降低,有统计学差异。与空白组相比,模型组大鼠ALT指标略有下降,AST水平稍有升高,组间无统计学差异,跟模型组相比,治疗组ALT、AST水平都无明显差异,均无统计学差异。2.对大鼠肾组织的病理影响通过显微镜观察大鼠的肾脏病理切片HE、Masson染色,可以更直观的观察肾组织的微观变化,腺嘌呤灌胃后肾脏变大,HE染色发现大鼠模型组肾小球数目明显减少,出现球囊黏连;肾小管腔内出现萎缩及扩张,可见炎症细胞、蛋白管型、空泡样变及脱落的上皮细胞,管中有棕色结晶;肾小球发生硬化,系膜基质出现增生,基底膜增厚;细胞增殖现象明显,纤维细胞和胶原纤维增多,肾间质纤维化明显。各治疗则跟模型组比较,肾小球数量有所回升,肾组织病变较模型组减轻,肾间质纤维化及炎性浸润减轻,中药高剂量组最为明显。Masson染色提示肾组织胶原纤维明显积聚,染色明显,充满整个肾间质,给药治疗后,各组肾间质内蓝染面积比模型组减少,胶原沉积也有所减轻,其中中药高剂量组改善最为显著。证明给药后纤维化进程有所改善。3.对Wnt/β-catenin信号通路及RIF表型指标蛋白表达的影响Western blot实验结果可得,在空白组中,肾组织有少量的Wnt4、β-catenin蛋白,腺嘌呤灌胃后Wnt4、β-catenin蛋白明显升高,说明其与慢性肾衰竭的发生相关。给予西药和中药治疗14天后,给药组的Wnt4、β-catenin蛋白均有所降低。其中中药高剂量组效果最明显,证明中药高剂量组对疾病最有效。模型组的大鼠肾组织中的α-SMA表达升高,而本应该高表达E-cadherin蛋白表达降低。给药治疗后,各治疗组α-SMA的蛋白表达均有所降低,中药高剂量组表现更为明显,各个治疗组E-cadherin的蛋白表达也均有升高,同样表现为中药高剂量组升高最显著。TGF-β1实验中腺嘌呤灌胃后它出现高表达。给予中药西药治疗后,各个治疗组蛋白表达均有不同程度下降趋势,其中中药高剂量组疗效最为好,说明中药高剂量组对慢性肾衰竭起到治疗作用。研究结论:1.肾衰降浊方能有效改善腺嘌呤大鼠模型的一般情况、增加体重、降血清尿素氮、肌酐、24h尿蛋白定量、改善肾功能等,西药和中药高剂量组疗效最好。2.肾衰降浊方可以改善腺嘌呤大鼠模型造成的病理改变,疗效最好的是中药高剂量组。3.肾衰降浊方能调控Wnt4/β-catenin信号通路,降低Wnt4、β-catenin、α-SMA和TGF-β1蛋白和m RNA转录水平的表达,升高E-cadherin蛋白和m RNA转录水平的表达,其中中药高剂量组疗效最好。降低胶原纤维和细胞外基质的过度沉积,缓解肾小管上皮细胞向间充质转分化,从而抗肾脏纤维化,防治慢性肾衰竭的进展。4.肾衰降浊方能抑制腺嘌呤大鼠模型引起的肾脏病理改变,其中药效最明显的为中药高剂量组。