背景:胰腺癌（pancreatic cancer，PC）是常见的消化系恶性肿瘤，患者就诊时已有80％发生局部侵袭和转移，5年生存率低于5％。在我国，随着人们饮食结构的变化及人口平均寿命的延长，此病有逐年升高的趋势，成为消化系肿瘤治疗的热点课题之一。确立有效的抑制转移治疗靶向，寻找一种有效抑制其转移的药物具有重要意义。从祖国传统动植物中药资源中寻找抗肿瘤创新性药物是中药研究的方向。东亚钳蝎是蝎类的一种，具有熄风解痉、攻毒散结、通络止痛的功效。近年研究证明，全蝎及其提取物对多种肿瘤细胞和部分移植性肿瘤有直接抑制作用。我们从东亚钳蝎蝎毒中提取了分子量在6000～7000，由50～60个氨基酸组成的多肽成分，命名为蝎毒多肽提取物（polypeptide extract from scorpion venom，PESV）。本研究组前期实验结果表明，PESV不仅对肿瘤细胞具有凋亡诱导作用，而且还可抑制肿瘤血管生成，提高荷瘤机体免疫功能，对肝癌、前列腺癌等多种肿瘤细胞有明显的抗转移作用，但其抗肿瘤的确切机制尚未全面阐明，关于其抗胰腺癌细胞侵袭转移的研究亦未见报道。 目的:研究蝎毒多肽提取物PESV对人高转移胰腺癌细胞MIA-PaCa2-3侵袭转移相关能力的影响及其作用的机制。为PESV在临床上治疗胰腺肿瘤提供理论根据。 方法:培养高转移的人胰腺癌细胞系MIA-PaCa2-3，通过细胞增殖实验（MTT比色法）观察在PESV影响下肿瘤细胞活性及增殖情况；选择PESV对肿瘤细胞的无毒剂量，通过细胞黏附实验、体外侵袭模型Transwell小室法和细胞划痕实验分别检测PESV干预对MIA-PaCa2-3细胞的黏附能力、侵袭能力和运动能力的影响；应用免疫细胞化学实验SP法和蛋白印迹实验检测PESV对胰腺癌细胞的E-钙粘蛋白、纤粘蛋白、尿激酶型纤溶酶原激活物和基质金属蛋白酶-9的蛋白表达水平的影响。 结果: 1． PESV对MIA-PaCa2-3细胞生长的影响：PESV<20 mg·L-1时，MIA-PaCa2-3细胞的IR<10．4％，对细胞的生长抑制作用不明显；PESV>40 mg·L-1时，IR>30．5％，对细胞的生长具有明显抑制作用（同对照组比较差异有统计学意义，P值均为0．000），PESV呈剂量依赖性抑制MIA-PaCa2-3细胞的增殖（实验组各浓度之间差异有统计学意义，P<0．05）。细胞增殖实验结果同时显示，PESV对胰腺癌细胞有呈明显时间效应关系的增殖抑制作用，与对照组比较细胞增殖抑制作用明显（P<0．05）。 2．PESV对MIA-PaCa2-3细胞粘附能力的影响：黏附实验表明PESV可降低胰腺癌细胞的黏附力，PESV（40 mg·L-1）干预8小时后，10、20、40 mg·L-1的PESV的黏附抑制率分别为（10．1±1．5），（18．32±2．5），（30．33±4．7）％，与对照组比较均有显著差异（P<0．05）。 3．PESV对MIA-PaCa2-3细胞侵袭能力的影响：3个浓度（10、20、40 mg·L-1）的PESV作用8小时侵袭力的抑制率分别为（12．3±2．2）、（25．6±3．6）、（42．1±3．7）％，不同浓度组比较差异有统计学意义（F=38．933，P=0．000），各浓度组与对照组比较差异有统计学意义（P值均为0．000）。 4．PESV对MIA-PaCa2-3细胞运动能力的影响：划痕实验的结果表明PESV可以使细胞的运动能力下降，PESV（40 mg·L-1）干预8小时后，肿瘤细胞运动能力的抑制率为（47．6±3．3）％，与对照组比较均有显著差异（P<0．05）。 5．PESV对MIA-PaCa2-3细胞MMP-9、FN、UPA和E-Cadherins表达的影响：免疫细胞化学检测分析显示，对照组和PESV组E-cad蛋白阳性表达率（％）分别为40．6±2．56和85．5±3．32，FN蛋白阳性表达率分别为86．5±4．12和43．9±2．63，UPA蛋白阳性表达率分别为73．3±3．88和54．2±4．10，MMP-9蛋白阳性表达率分别为74．9±3．76和44．5±1．11，差异均有显著性意义（P<0．05）。表明PESV干预后，胰腺癌细胞E-钙粘蛋白阳性表达细胞数量上升，灰度值明显上调（P<0．05），FN、UPA及MMP-9蛋白阳性表达数量减少，灰度值明显下调（P<0．05）。 结论: 1．PESV浓度在>40mg·L-1时对胰腺癌MIA-PaCa2-3细胞生长和增殖具有时间和浓度依赖性抑制作用。 2．MIA-PaCa2-3细胞可表达MMP-9、UPA、FN及E-Cadherins蛋白，定位于细胞浆；PESV可以抑制胰腺癌细胞MMP-9、UPA和FN的分泌，增强E-Cadherins蛋白的表达，从而增加胰腺癌MIA-PaCa2-3细胞之间的粘附性，抑制其降解周围细胞外基质和基底膜。推断PESV可能通过影响MMP-9、FN、UPA及粘附因子E-Cadherins而影响肿瘤细胞的侵袭性。 3．PESV在具有较弱抑制肿瘤细胞生长作用的同时，可抑制癌细胞穿过人工基底膜，并具有抑制肿瘤细胞的运动能力的作用。推断如果病人使用PESV并达到有效血液浓度，能够抑制癌细胞的侵袭与转移能力。