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目的：本课题采用形态学以及分子生物学等实验方法，观察了补脾益气方药治疗前、后的脾虚哮喘大鼠模型气道黏液高分泌、AQP5表达等变化，旨在探讨补脾益气方药对脾虚哮喘气道黏液高分泌的影响及机制，为阐明补脾益气方药治疗脾虚型哮喘的药理学机制、以及为中医“脾为生痰之源，肺为贮痰之器”的理论提供实验依据。
材料与方法：
50只Wistar雄性大鼠，按照随机数字法分为5组：生理盐水对照组(对照组)，脾虚哮喘模型组(脾虚哮喘组)，哮喘模型组(哮喘组)，脾虚哮喘中药治疗组(脾虚哮喘治疗组)，哮喘中药治疗组(哮喘治疗组)。脾虚哮喘组和脾虚哮喘治疗组首先采用饮食不节、疲劳过度和苦寒泄下等复合因素作用建立脾虚模型，共10d。然后，与哮喘模型组和哮喘治疗组一起采用卵蛋白致敏和激发的方法建立哮喘模型。在实验第11d脾虚模型建立成功后，脾虚哮喘治疗组和哮喘治疗组给予补脾益气方药进行灌胃治疗，共21d。
1.实验第32d进行外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(Eos)百分比测定；采用苏木素.伊红(HE)染色法进行肺组织病理形态学测定；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行血清总免疫球蛋白E(IgE)含量、血清和BALF中白介素—4(IL—4)、干扰素—γ(IFN—γ)含量及BALF中黏蛋白5AC(MUC5AC)含量测定：采用逆转录聚合酶联反应(RT—PCR)进行肺组织MUC5AC的mRNA表达水平测定；采用免疫组化法进行肺组织MUC5AC蛋白表达水平测定；
2.实验第32d进行肺组织湿/干质量比测定；采用RT—PCR.进行肺组织AQP5的mRNA表达水平测定；采用免疫组化法和免疫印迹法进行肺组织AQP5蛋白表达水平的测定：
3.采用ELISA进行血清和BALF中TNF—α含量测定；采用免疫组化法进行肺组织IkBα蛋白表达水平和NF—kBp65入核率测定。
结果：
1.外周血和BALF中EOS百分比检测结果显示：与对照组比较，脾虚哮喘组与哮喘组均显著升高(P<0.01)，而脾虚哮喘组明显高于哮喘组(P<0.01)；但脾虚哮喘治疗组则低于脾虚哮喘组(P<0.01)，哮喘治疗组低于哮喘组(P<0.01)。
2.血清和BALF中IL—4和IFN—γ含量、及血清总IgE含量检测结果显示：与对照组比较，脾虚哮喘组和哮喘组血清和BALF中IL—4与血清总IgE含量均显著升高(P<0.01)，而IFN—γ，含量与IFN—γ/IL—4比值均显著降低(P<0.01)；但脾虚哮喘组上述变化较哮喘组更加明显(P<0.01)。与脾虚哮喘组或哮喘组比较，脾虚哮喘治疗组或哮喘治疗组血清和BALF中IL—4和血清总IgE含量均降低(P<0.01)，而IFN—γ含量与IFN—γ/IL—4比值均升高(P<0.01)。
3.光学显微镜观察，可见脾虚哮喘组和哮喘组大鼠的支气管管壁和伴行动脉周围有较多的Eos、单核细胞和淋巴细胞浸润，并且支气管黏膜皱壁增多、延长，气管管腔缩小，杯状细胞增生，基底膜增厚，气道腔内可见炎性分泌物，有的小支气管被黏液栓和炎性细胞所闭塞。脾虚哮喘治疗组和哮喘治疗组炎性细胞浸润、杯状细胞增生等症状得到改善。
4.大鼠BALF中MUC5AC含量和基因表达结果显示：与对照组比较，脾虚哮喘组和哮喘组均显著升高(P<0.01)。其中脾虚哮喘组表达水平高于哮喘组(P<0.01)，经治疗后，两治疗组基因表达水平均低于治疗前水平(P<0.01)。
5.肺组织湿/干质量比值结果显示：与对照组比较，脾虚哮喘组和哮喘组均显著升高(P<0.01)，且脾虚哮喘组高于哮喘组(P<0.01)。但是，脾虚哮喘治疗组则低于脾虚哮喘组(P<0.01)；哮喘治疗组则低于哮喘组(P<0.01)。
6.肺组织AQP5的mRNA和蛋白表达结果显示：与对照组比较，脾虚哮喘组和哮喘组均显著降低(P<0.01)，并且脾虚哮喘组低于哮喘组(P<0.01)；经治疗，两治疗组其表达分别高于治疗前水平(P<0.01)。
7.血清和BALF中TNF—α含量测定结果表明：与对照组比较，脾虚哮喘组和哮喘组均显著升高(P<0.01)，但是脾虚哮喘组和哮喘组组间比较则无差异性(P>0.05)。不过脾虚哮喘治疗组显著低于脾虚哮喘组(P<0.01)，哮喘治疗组低于哮喘组(P<0.01)。
8.肺组织IkBα和NF—kBp65的免疫组化结果表明：与对照组比较，脾虚哮喘组和哮喘组大鼠肺组织IkBα的蛋白表达水平均降低，而NF—kBp65入核率增加(P<0.01)，此变化在脾虚哮喘组表现的更为明显(P<0.01)。但是，经过治疗后，两治疗组上述变化分别高于、低于治疗前(P<0.01)。
9.相关性分析结果：肺组织AQP5的表达水平和BALF中MUC5AC的含量和MUC5AC表达水平呈负相关。血清和BALF中TNF—α的含量和肺组织IkBα表达水平呈负相关，和肺组织NF—kBp65入核率呈正相关：肺组织NF—kB活性和肺组织AQP5的表达水平呈负相关。肺组织NF—kB活性和BALF中MUC5AC含量和肺组织MUC5AC的表达水平呈正相关。
结论：
1.脾虚使哮喘大鼠模型外周血和BALF中EOS百分比、血清IL—4及血清总IgE含量进一步增加，IFN—γ含量进一步下降。补脾益气方药能够将其逆转。
2.脾虚使哮喘模型大鼠肺组织湿/干质量比值、BALF中MUC5AC含量、肺组织MUC5AC表达进一步升高；肺组织AQP5的表达水平进一步降低。补脾益气方药均能够使其不同程度逆转。
3.补脾益气方药能够降低脾虚哮喘和哮喘大鼠模型血清以及BALF中TNF—α的含量。
4.脾虚使哮喘模型大鼠肺组织IkBα的蛋白表达水平降低，NF—kBp65入核率增加。补脾益气方药能够对其进行纠正。
5.与单纯哮喘比较，哮喘伴有脾虚证的大鼠模型其病理改变程度明显加重；补脾益气方药能够对其进行纠正。