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目的：借助微生物学、生物化学、分子生物学技术,对分离自北京、湖南、广东等地区医院临床标本的58株苍白杆菌进行种系分析和菌株特征鉴定,了解菌株之间的遗传学关系,并评估不同微生物学和基因学鉴定方法的特点,为建立快速、准确和敏感的苍白杆菌属鉴定方法提供依据。方法：收集2012年2月至2013年5月分离于北京、湖南、广州等地医院及1家医学独立实验室的苍白杆菌58株,所有菌株均由Viteck鉴定卡鉴定；进而,运用不同技术平台进行系统研究,包括：形态学观察,生化反应(API、Viteck鉴定卡),基因测序分析(16S基因、recA基因、16-23S内部转录间隔区),脉冲场凝胶电泳,随机引物PCR扩增等。对所得数据进行综合分析,构建系统进化树,对可疑新种进行DNA-DNA杂交,确定这些临床菌株的遗传学关系、菌株特征和基因型,并进行方法学比较。结果：本研究涉及的58株人苍白杆菌,均经过Viteck鉴定卡初步鉴定；通过基因测序分析,确定32株为苍白杆菌属,包括17株人苍白杆菌,9株中间苍白杆菌,4株假贵格纳苍白杆菌,1株嗜血苍白杆菌和1株可疑的新种；药敏分析显示苍白杆菌属对青霉素类和头孢菌素类耐药率高,人苍白杆菌和中间苍白杆菌对氨基糖苷类表现出不同的耐药性。根据16S基因、recA基因、16-23S内部转录间隔区测序结果构建进化树,可将苍白杆菌进行区分。对测序鉴定的26株解糖精假苍白杆菌进行脉冲场凝胶电泳和随机引物PCR扩增,结果显示出较好的一致性。结论：1. API、Viteck鉴定卡对苍白杆菌鉴定不够准确,基因测序法可准确鉴定苍白杆菌属到种的水平。2.药敏分析结果表明苍白杆菌属对青霉素类、头孢菌素类耐药率高,人苍白杆菌和中间苍白杆菌对氨基糖苷类药物敏感率存在明显差异。3.种系分析显示16S、recA、16-23S ITS进化树对于菌株的辨识度不同,但均可区分人苍白与中间苍白杆菌。4.脉冲场凝胶电泳和随机引物PCR扩增在监测院内感染暴发流行方面具有重要意义。