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第一部分大气压低温等离子体射流对白念珠菌的杀灭作用研究 目的:初步探讨大气压低温等离子体射流(atmospheric pressure non-thermal plasma jet, APNP-J)对白念珠菌的杀灭作用及其灭菌机制。 方法:白念珠菌(Candida albicans)菌株SC5314经APNP-J照射处理后,对菌落形成单位(Colony Forming Unit, CFU)进行计数,并利用XTT减低法检测白念珠菌存活率,评估该装置的杀菌能力,最后检测处理后菌液pH的改变。 结果: APNP-J对白念珠菌有较好的杀灭效果,随着处理时间的增加,白念珠菌存活率越低。处理2分钟已杀灭约50%的真菌(P<0.05),处理8分钟可杀灭近90%的真菌(P<0.05),但XTT减低法仅检测到38.7%的灭活率。随着处理时间增加, pH逐渐下降,8分钟处理后pH已降至3.29。 结论: APNP-J可快速有效地杀灭白念珠菌浮游菌,在杀灭真菌及治疗白念珠菌感染等领域有广阔的应用前景。但它对白念珠菌的杀灭效果不如对细菌的杀灭效果强,可能在灭菌机制上与细菌有差别。 第二部分大气压低温等离子体射流作用下白念珠菌生物膜生存能力研究 目的:初步探讨大气压低温等离子体射流(APNP-J)对白念珠菌生物膜的破坏作用以及经APNP-J照射后的白念珠菌的生物膜形成能力。 方法:制备白念珠菌生物膜体外模型,经APNP-J照射处理后,用Calcein-AM、碘化丙啶(PI)双染色后激光共聚集显微镜观察其存活能力。同时,用APNP-J处理白念珠菌浮游菌,用以制备生物膜模型,XTT减低法检测生物膜的形成能力。 结果:经处理的白念珠菌浮游菌,生物膜的形成能力受到了影响,XTT法检测到经8分钟处理后,存活率为未处理组的58.3%。同时,激光共聚集显微镜观察发现,随着对生物膜体外模型处理时间增加,膜内发出绿色荧光的活菌越来越少,发出红色荧光的死菌越来越多。经8分钟处理后,生物膜中几乎无活菌。Image-Pro Plus图像处理软件对荧光图片进行荧光强度分析,亦得到一致结果。 结论: APNP-J不仅可以直接破坏生物膜,杀灭生物膜中活菌,还能影响浮游菌的生物膜形成能力,故有望应用于临床上体内白念珠菌感染形成生物膜的杀灭和治疗。 第三部分大气压低温等离子体射流对小鼠口腔念珠菌病模型的治疗作用研究 目的:初步探讨大气压低温等离子体射流(APNP-J)对小鼠口腔白念珠菌感染的抗菌治疗作用。 方法:构建小鼠口腔白念珠菌病(oropharyngeal candidiasis, OPC)模型,并用APNP-J每日处理小鼠舌背皮损。处理结束后,取小鼠舌组织,菌落计数法(CFU)评估该装置的杀菌能力,HE染色和PAS染色评估小鼠白念珠菌感染程度。同时, APNP-J处理未染菌的野生型小鼠,评估低温等离子体对正常舌组织的安全性。 结果:小鼠OPC模型成功构建。APNP-J处理时间越长,OPC小鼠舌背皮损面积越小,假膜形成越少,但6分钟的处理效果不如4分钟。CFU计数、HE染色和PAS染色结果与肉眼观一致。发现WT小鼠经每日6分钟的APNP-J处理,虽然舌背肉眼未发现损伤,但HE染色和PAS染色均证实已出现表皮损伤。 结论:大气压低温等离子体对OPC小鼠处理,4分钟就可以达到较好的杀菌效果,但可能由于处理面积集中、局部温度升高等原因,6分钟的处理有可能损伤表皮,反而加重感染。因此,大气压低温等离子体有潜在的治疗浅部白念珠菌感染的作用,但仍需进一步优化装置以达到更好的处理效果。