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乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)是引起母猪繁殖障碍的主要病因之一，给养猪业造成了巨大的经济损失，同时乙型脑炎是一种人畜共患病，是人类中枢系统最常见的虫媒病之一。因此，建立一种安全、简便、经济的制备乙脑诊断抗原的方法，寻求稳定、安全、新型的乙脑基因工程疫苗已经成为当今JEV防治的主要研究方向。本研究以乙型脑炎(JEV)SA14-14-2株全基因作为模板，根据文献设计出两对特异性引物，采用RT-PCR技术人工扩增出了JEV SA14-14-2株prM-E、E基因的cDNA。将纯化的prM-E基因成功地克隆到pUC19载体中，再转化到大肠杆菌JM109感受态细胞，得到的转化子经分子量比较和酶切分析筛选阳性克隆。结果表明，得到的阳性重组子(pUC19-prME)中含有prM-E基因，并且正确插入到载体中。将prM-E基因克隆到PET32a(+)载体上，得到的转化子经酶切分析，筛选出符合阅读框的重组子，构建成重组表达质粒PET-prME，再将重组表达质粒转化进宿主菌BL21(DE3)，在IPTG诱导下表达出约为89KDa、53KDa和36KDa的三条蛋白带。经SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测证实表达产物具有免疫学活性，这为制备乙脑特异性抗原奠定了基础。作者将prM-E、E基因克隆到pcDNA3.1(+)载体上，得到的转化子经酶切分析，筛选出符合阅读框的重组子，构建成重组质粒pcDNA-prME和pcDNA-E。将构建好的重组质粒对Balb／c鼠进行DNA免疫：每组5只、4周龄、雌性Balb／c鼠共4组，分别将溶于50μL灭菌PBS溶液的不同免疫原肌注于不同组鼠的左后肢，具体包括pcDNA-prME，pcDNA-E，pcDNA 3.1各50μg，单纯PBS 50μL，共免疫2次，间隔2周。二次免疫两周后，各试验组小鼠(5／5)健康存活。分别采集各组小鼠的血，并分离血清，利用中和试验对抗体进行效价测定。结果是pcDNA-PRME、pcDNA-E免疫组的中和滴度分别为1：35和1：20。可以得出结论：使用pcDNA-prME与pcDNA-E重组质粒对小鼠进行肌肉注射可以产生中和抗体，pcDNA-prME所致的中和滴度略高于pcDNA-E。目前针对黄病毒的疫苗大多包含包膜E蛋白的中和抗原表位，而prM蛋白对维持E蛋白结构是必要的。因此，本研究分别用pcDNA-prME、pcDNA-E免疫小鼠，对比其免疫效果，为JEV核酸疫苗的研发提供了一些资料，创造了一定的条件。