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宫颈癌是严重影响女性健康的主要杀手之一，引起女性宫颈癌的主要原因是人乳头状瘤病毒（HPV）感染，70%以上的宫颈癌是由HPV16和HPV18型引起，单纯疱疹病毒（HSV）作为辅助因子可能具有协同作用。对HPV和HSV的快速诊断是预防控制宫颈癌和研究宫颈癌病因的关键，本研究是基于宫颈癌相关病毒的基因分型而建立一种准确、敏感和快速检测HPV16、HPV18、HSV1和HSV2的多重荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，为宫颈癌的病因学研究和早期筛查、治疗评估提供检测手段。本课题构建了HPV16、HPV18、HSV1和HSV2的重组质粒，并以质粒为标准品，建立了同步定量检测和区分HPV16、HPV18、HSV1和HSV2的四重FQ-PCR方法，为评估该方法的准确性和实用性，采用DNA测序法作为标准方法，对177例疑似HPV和HSV感染的临床标本进行检测，以方法的临床敏感性、特异性、总符合率和一致性系数。结果显示，本课题所建立的四重FQ-PCR方法对HPV16、HPV18、HSV1和HSV2的检测线性范围均在1×101到1×107copies/reaction；临床敏感性均为100%；特异性分别为97.1%、98.1%、97.0%和96.0%；总符合率分别为97.7%、98.3%、97.7%和97.2%；一致性系数分别为0.96、0.92、0.94和0.93。四重FQ-PCR方法检测HPV16、HPV18、HSV1和HSV2的阳性结果的含量与单重FQ-PCR方法相比，其相关性分别为0.970、0.965、0.969和0.966。应用建立的多重FQ-PCR方法分别对233例正常、333例宫颈炎、210例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）和24例宫颈癌四组共800例入选者的宫颈脱落细胞进行HPV16、HPV18、HSV1和HSV2定量检测。结果显示，与正常宫颈组相比，单项HPV16的感染与宫颈癌及其癌前病变有显著的统计学差异（p<0.01），宫颈炎、CIN和宫颈癌的ORs分别为3.4(95%CI为1.6-7.2)、6.2(95%CI为3.0-12.9)和16.9(95%CI为7.5-38.2)；单项HPV18的感染与宫颈癌及其癌前病变有显著的统计学差异（p<0.01），宫颈炎、CIN和宫颈癌的ORs分别为2.9(95%CI为1.1-7.5)、6.4(95%CI为2.6-16.1)和12.0(95%CI为4.4-33.1)；单项HSV2的感染与宫颈癌和CIN也有显著的统计学差异（p<0.01），其ORs分别为2.6(95%CI为1.6-4.2)和2.5(95%CI为1.3-4.9)；而单项HSV1的感染与宫颈癌及其癌前病变无统计学差异。HSV与HPV的混合感染出现于各病变组，与正常宫颈组相比，HSV2与HPV(HPV16和/或HPV18)的共感染显著加重宫颈癌及其癌前病变的危险性（p<0.01），CIN和宫颈癌的ORs分别为7.0(95%CI为1.6-29.3)和30.4(95%CI为6.9-33.1)。本课题建立的HPV16、HPV18、HSV1和HSV2的多重FQ-PCR检测方法具有灵敏性高、特异性强、操作简单、高通量等特点，适合临床用于同步快速鉴别和定量HPV的16和18型及HSV的1和2型。HPV16、HPV18和HSV2的单独和混合感染均与宫颈癌的发生和发展相关，而HSV1单独和混合感染可能与宫颈癌及其癌前病变无关。