论文部分内容阅读
【目的】1、证实TGF-β1和IGF-1单独及联合都能够诱导BMSCs向类髓核细胞分化。2、在骨髓间充质干细胞和髓核细胞体外非接触共培养条件下，探讨不同比例TGF-β1(转化生长因子β1)和IGF-1(胰岛素样生长因子1)诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞转化的作用。【方法】应用贴壁培养法体外分离、鉴定、培养、扩增兔BMSCs和髓核细胞;将原代髓核细胞和第二代生长良好的BMSCs消化后制成细胞悬液,然后在transwell培养板中共培养,上层放BMSCs,下层放NPCs,分为不加入（对照组）,加入IGF-1（实验组1）、TGF-β1（实验组2）、IGF-1与TGF-β1混合（比例分别为10:1,5:1,1:1,1:5,,1:10,相对应实验组4、5、6、7、8）诱导;共培养5、10、15、20、25d后,分别观察细胞形态变化,并利用RT-PCR（reverse transcription PCR）和Western blot检测其表达的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原含量,以寻找最佳培养方式。【结果】RT-PCR和Western blot检测结果,发现在8组实验中，第5、10、15天,蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达的相对含量都逐渐增加,组间比较均具有统计学意义,而在第15、20、25天,二者相对含量变化不大,组间比较无统计学意义。在相同的培养条件下，当IGF-1/TGF-β1的比值1/5时,蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达的相对含量达到最大,组间比较均具有统计学意义,而IGF-1/TGF-β1比值继续增大时,二者相对含量变化不大,组间比较无统计学意义。【结论】1、BMSCs和NPCs共培养可以诱导BMSCs向NPs分化,并且共培养15天左右,蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达含量已达到最佳状态。2、TGF-β1和IGF-1单独及联合都能够诱导BMSCs向NPs分化。3、在定量的BMSCs和NPCs体外共培养条件下,IGF-1与TGF-β1比例为1:5时，经诱导的骨髓间充质细胞合成Ⅱ型胶原和蛋白聚糖蛋白已达到最佳值。