运用双分子荧光互补技术在活体细胞中特异性检测RNA G-四链体结构的形成

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:emailtoli2
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
G-四链体结构是一种富含鸟嘌呤的核酸二级结构,在DNA和RNA上广泛分布。由于其可影响细胞内的转录、翻译等生理活动,故也被认为是潜在的药物作用靶点。然而,目前还没有一种有效的方法能够检测细胞内某一特定的富含鸟嘌呤的核苷酸序列是否形成G-四链体结构。本研究正是基于此,提供了一种方法,可在细胞生理环境下判断一特定RNA序列是否形成G-四链体结构。  在双分子荧光互补技术的基础上,我们将需要研究的RNAG-四链体结构序列安排在一段RNA适配体序列的旁侧,将识别RNA G-四链体结构和RNA适配体的多肽分别融合在荧光蛋白EGFP的C端片段和N端片段上,并且同时表达。一旦该G-四链体结构形成,则相应的探针融合蛋白便被招募到一起,从而组装成一功能完整的EGFP分子而产生荧光信号。以严格点突变后的G-四链体结构序列为对照,我们首先通过EMSA和体外BiFC模拟等实验证实了该方案的可行性,然后借助流式细胞术分析细胞体内结构组和突变组的各种BiFC系列的荧光信号表现,并通过pull down实验证实了细胞内RNA和相应探针蛋白的相互作用。如此,我们便完成了对细胞体内特异的RNA G-四链体结构的检测。  本研究不仅证实了活体细胞内G-四链体结构的存在,而且也阐述了一种有效检测细胞内特定RNA G-四链体结构形成的方法,为细胞内G-四链体结构的研究提供了一种独特的视角。
其他文献
一些特殊的环境因素如:丰富环境、应激等能够对脑的某些高级认知功能产生广泛的影响。单胺类神经递质系统对脑的高级认知功能也起着重要的作用。我们在前人的工作基础上,通过
随着数字化的通信与计算深入到生活当中的各个领域,物联网这种新兴的信息架构蓬勃发展起来。它的基本思想是将普遍存在于人们周围的多样的智慧对象,如RFID标签、传感器、手机
研究辐射粒子在微米和纳米级靶体内的能量沉积分布规律是深入探索辐射损伤效应产生机制的关键因素之一。由此微剂量学广泛应用于辐射防护、放射生物学和微电子学辐射效应等研
蛋白质泛素化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,其参与真核生物几乎所有方面的生命过程。蛋白质泛素化修饰需要泛素经过泛素激活酶(E1)、泛素接合酶(E2)以及泛素连接酶(E3)的
三维四面体网格在各个学科领域中扮演着越来越重要的角色,如有限元分析、流体力学、电磁场与波、工程力学等。如何划分出更好的网格,已经成为当今业界研究中的关键技术,相比国外
本文研究了亚纯(全纯)函数族与分担值的问题,得到了涉及微分多项式分担值或分担集合的几个正规定则。本研究分为四个部分: 第一章从亚纯函数正规族理论的历史发展及应用出发
随着半导体工艺的进步和信息技术的发展,芯片的数据处理能力和芯片之间的数据交换能力变得越来越重要。在FPGA芯片中,为了满足复杂的系统级的设计需求,芯片经常需要与外部存
超宽带天线在电子对抗、探地雷达和电磁兼容测量方面的需求是非常迫切的。这些应用领域的天线通常要求有几个、甚至十几个以上倍频的带宽。常用的天线类型有螺旋天线、渐变开
p15rs基因是我室在p15INK4B高表达的人黑色素瘤细胞系MLIK6中筛选并克隆到在mRNA水平上高表达的新基因。已有的实验证据表明,在细胞间期,p15rs主要定位于核内。本文在前人已经
近年来,以大规模、集成化、多色化、微弱信号和三维探测为主要特点的第三代红外焦平面探测器成为碲镉汞红外焦平面探测器的主要发展方向。碲镉汞红外雪崩光电二极管(APD)探测