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G-四链体结构是一种富含鸟嘌呤的核酸二级结构,在DNA和RNA上广泛分布。由于其可影响细胞内的转录、翻译等生理活动,故也被认为是潜在的药物作用靶点。然而,目前还没有一种有效的方法能够检测细胞内某一特定的富含鸟嘌呤的核苷酸序列是否形成G-四链体结构。本研究正是基于此,提供了一种方法,可在细胞生理环境下判断一特定RNA序列是否形成G-四链体结构。 在双分子荧光互补技术的基础上,我们将需要研究的RNAG-四链体结构序列安排在一段RNA适配体序列的旁侧,将识别RNA G-四链体结构和RNA适配体的多肽分别融合在荧光蛋白EGFP的C端片段和N端片段上,并且同时表达。一旦该G-四链体结构形成,则相应的探针融合蛋白便被招募到一起,从而组装成一功能完整的EGFP分子而产生荧光信号。以严格点突变后的G-四链体结构序列为对照,我们首先通过EMSA和体外BiFC模拟等实验证实了该方案的可行性,然后借助流式细胞术分析细胞体内结构组和突变组的各种BiFC系列的荧光信号表现,并通过pull down实验证实了细胞内RNA和相应探针蛋白的相互作用。如此,我们便完成了对细胞体内特异的RNA G-四链体结构的检测。 本研究不仅证实了活体细胞内G-四链体结构的存在,而且也阐述了一种有效检测细胞内特定RNA G-四链体结构形成的方法,为细胞内G-四链体结构的研究提供了一种独特的视角。