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外泌体(exosomes)是大多数类型细胞通过多泡小体与质膜融合分泌出的纳米级的膜结合囊泡,它能够通过转运各种脂质、蛋白、核酸在细胞间通信中发挥关键作用,同时具有免疫调节特性。在本研究中,探索了阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis,T.vaginalis)分泌的外泌体在免疫反应方面的作用,并分析了它对生殖系统肿瘤细胞增殖转移功能的影响。 目的:探索T.vaginalis外泌体介导宫颈上皮细胞和前列腺上皮细胞免疫反应,以及对宫颈癌和前列腺癌细胞增殖转移功能方面的作用。 方法:临床收集的T.vaginalis阳性标本达到体外纯培养标准后提取T.vaginalis外泌体,并通过透射电子显微镜(TEM)、纳米粒子跟踪技术(NTA)鉴定。用荧光染料PKH67标记T.vaginalis外泌体检测它被人宫颈永生化鳞状细胞Ect1、人正常前列腺上皮细胞RWPE1、人宫颈鳞状细胞癌细胞Siha、人前列腺癌细胞PC3的摄取情况。在外泌体的刺激下,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测四种细胞培养上清中白介素6(IL6)、白介素8(IL8)的分泌,并用定量PCR技术观察细胞中几种白介素mRNA变化水平。然后运用MTT法观察外泌体的加入对Siha和PC3细胞增殖的影响。最后利用划痕愈合实验和Transwell实验检测摄入外泌体对Siha和PC3细胞迁移侵袭能力的改变,并用Western Blot观察了上皮间质转化(EMT)相关蛋白的变化。 结果:成功从临床标本中分离得到T.vaginalis并进行体外纯培养,扩大培养提取获得了T.vaginalis外泌体。用PKH67标记的T.vaginalis外泌体能够被摄取进入到Ect1、RWPE1、Siha、PC3细胞内。在外泌体的作用下,Ect1和RWPE1细胞上清中分泌的IL6、IL8均升高,但Siha和PC3未见明显变化。用外泌体刺激肿瘤细胞,对Siha和PC3细胞增殖没有明显作用,但是能够增强两种细胞迁移侵袭能力,并且这一变化是通过EMT介导的。 结论:T.vaginalis外泌体能够作用于宫颈癌上皮细胞和前列腺癌上皮细胞并引起它们的炎症免疫反应,还可以导致宫颈癌和前列腺癌转移能力增强,EMT是引起这种改变的机制之一。