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断奶仔猪腹泻(PWD)问题一直是养猪业的难题,每年都给全球经济造成巨大损失。目前主要是依靠抗生素防控PWD的发病率,并有明显下降。研究表明,益生菌作为补充剂添加到饲料中具有良好效果。但是,乳酸菌制剂存在作用效果较弱、保存困难等问题。因此,本试验旨在制备出优质的乳酸菌(SeAg-LAB)制剂及乳酸菌源硒、银的纳米颗粒(SeAg-NA),增强乳酸菌制剂在临床中使用效果,提高仔猪机体免疫力,预防疾病发生。本研究首先对PWD流行病学调查,然后制备出SeAg-LAB、SeAg-NA,之后进行动物试验,分析SeAg-LAB、SeAg-NA的应用对ETEC K88感染引起的肠道损伤的保护作用。得出以下结果:流行病学研究调查显示,从黑龙江省断奶仔猪腹泻248份粪便样品中分离出238株致病性大肠杆菌。检测结果表明,F4、F18、F41阳性率分别为8.4%、11.34%、27.73%,STa、STb、EAST1阳性率分别为44.96%、28.15%、20.59%。与文献报道相比,F41菌毛基因的检出率增高,STa、STb等毒素基因检出率也在上升,但是不同国家不同地区毒力基因的检出率均存在差异性。生物被膜形成能力的测定结果显示,大约70%菌株具有中等-强生物被膜形成能力,且99%的菌株显示多重耐药。遗传分群鉴定结果表明,A型是主要分型,达到69.54%。在了解流行病学基本情况后,筛选适合用于制备富Se-Ag能力强的菌株,并优化得到短乳杆菌23017,其最高耐亚硒酸钠浓度、硝酸银浓度均为320μg/mL,且转化硒、银的能力较稳定。制备出耐常温SeAg-LAB制剂及SeAg-NA。SeAg-LAB制剂可以提高乳酸菌存活率,得到2个配方:配方3为脱脂乳15%、海藻糖5%、甘露醇0.3%;配方4为明胶4%、酪蛋白8%、甘氨酸1%。常温保存3个月乳酸菌存活率均可保持在10~5-10~6(CFU/g),之后对SeAg-NA进行电镜观察,对SeAg-NA进行抑菌效果分析。为评价SeAg-LAB、SeAg-NA的应用对ETEC K88损伤的肠道黏膜是否产生保护效果,使用小鼠模型进行动物试验,分别设置对照组、感染组、富Se-Ag的乳酸菌组(SeAg-LAB+230组)、乳酸菌源Se-Ag纳米颗粒组(SeAg-NA+230组),检测抗氧化相关指标、细胞因子及肠道黏膜屏障相关mRNA表达水平。结果表明,SeAg-LAB、SeAg-NA均促进GSH-Px的产生,可以减轻MDA对细胞损伤,并且在ETEC K88的感染时促进cryptdin-1、mucin-2、TLR-2的表达;SeAg-NA抑制IL-6的表达,具有抑制炎症发生的功能;SeAg-LAB、SeAg-NA的应用对ETEC K88损伤的小鼠肠道黏膜具有保护作用。其次,为评价SeAg-LAB、SeAg-NA对仔猪生长是否具有促进作用,对仔猪进行动物试验,表明SeAg-LAB及SeAg-NA作为饲料添加剂具有一定促生长效果。本研究制备出的安全、有效、便利、常温保存的乳酸菌制剂,作为补充剂改善动物健康,有助于提高养殖业的生产效益,提高仔猪机体免疫力、促进仔猪增重、提高饲料转化率,有望用于临床中预防仔猪腹泻发生,为临床应用提供理论基础和依据。