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第一部分:G-CSF动员自体骨髓源性细胞对博莱霉素致肺损伤小鼠保护作用的研究
目的:
观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员自体骨髓源性细胞(BMDCs)对博莱霉素(BLM)所致肺损伤小鼠的保护作用及机制探讨。
方法:
第一部分干细胞行踪观察:小鼠(C57BL/6)共分为四组:G-CSF动员组(BLM3.5mg/kg气管内滴注造模后第二天予G-CSF100ug/kg·d皮下注射5天);BLM对照组(BLM造模/生理盐水组);G-CSF对照组(正常小鼠/G-CSF动员组);空白对照组(正常小鼠/生理盐水组)。在造模后3、7、10、14、28天每组各6只取材,检测各组小鼠外周血及肺组织中骨髓来源干细胞比例、肺组织HE染色、Masson胶原染色、肺组织匀浆羟脯氨酸含量;ELISA法检测肺组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)的表达。第二部分动物存活率观察:另有BLM+G-CSF-A组(G-CSF100ug/kg-d动员5天)及BLM+G-CSF-B组(50ug/kg-d动员10天)、BLM对照组各留20只小鼠观察其存活时间。
结果:
(1)G-CSF动员组外周血及肺组织中骨髓源性细胞比例较BLM对照组升高,在造模后7天达到高峰,约14天降至正常水平。
(2)G-CSF动员组的肺泡炎症程度、肺纤维化程度、肺组织匀浆羟脯氨酸含量在第7、14、28天时均低于相对应BLM对照组,差异有统计学意义。
(3)G-CSF动员组肺组织匀浆中MMP-9含量在第7、14、28天时高于对应BLM对照组,TIMP-1含量均低于对应的BLM对照组,差异有统计学意义。
(4)BLM+G-CSF-A组和BLM+G-CSF-B组小鼠生存率均高于BLM对照组,但A组和B组之间没有统计学差异。
结论:
G-CSF能够将骨髓源性细胞动员至外周血,并向损伤肺组织募集,对博莱霉素所致肺损伤小鼠有一定的保护作用,减轻肺泡炎症,降低纤维化,调节MMP-9/TIMP-1比例异常,提高生存率。
第二部分:BLM致小鼠肺纤维化过程中上皮间质转分化(EMT)和间质上皮转分化(MET)现象的观察
目的:
BLM致小鼠肺纤维化过程中上皮间质转分化(EMT)和间质上皮转分化(MET)现象的观察。
方法:
小鼠(C57BL/6)共分为两组:造模组(BLM3.5mg/kg气管内滴注造模);空白对照组(生理盐水气管内滴注造模组)。在造模后7、14、21、28、35、42、49、56天每组各5只取材,检测各组小鼠肺组织HE染色,real-time PCR测定小鼠肺组织申上皮标志物E钙粘蛋白(E-cadherin)及问质细胞标记物a平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的mRNA的表达量,免疫组化染色测定肺组织中E-cadherin及a-SMA的表达。
结果:
(1)BLM造模小鼠肺组织HE染色显示7天时肺泡炎症达高峰,28天时形成了稳定的纤维化,后期趋于稳定。
(2)肺组织中E-cadherin的mRNA表达量在选模7天达高峰,28天降至最低点后开始升高,致49天与空白对照组无统计学差异。a-SMA的mRNA表达量造模后即开始增加,至21天达高峰后开始下降,造模35天后各时闯点无明显差异,但均高于空白对照组。
(3)肺组织切片免疫组化染色显示E-cadherin在7天时表达增多,后期随着纤维化病灶形成几乎无阳性表达,同时a-SMA在造模后即开始增加,21天时肺内表达量达离峰。
35天后,肺组织内E-cadherin稍有增多,a-SMA表达趋于稳定。
结论:
在BLM诱导小鼠肺纤维化过程中前期存在EMT,后期存在MET,对BLM所致小鼠肺纤维化有一定自限性的现象可做出部分解释。