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目的：拉帕替尼作为治疗HER2阳性进展期胃癌患者的靶向新药,临床试验初步结果不尽如人意,旁通路激活是靶向药物耐药的重要机制之一。本研究通过体外实验探讨HER3旁通路的激活对经拉帕替尼处理的HER2阳性胃癌细胞的生长和信号传导通路的作用,研究阻断HER3通路后HER2阳性胃癌细胞对拉帕替尼敏感性的影响及其分子机制。方法：(1)采用蛋白质印迹检测HER2阳性细胞NCI-N87、SNU-216、SKBR3的HER家族受体表达情况。克隆形成实验观察生长因子NRG1激活HER3受体后,肿瘤细胞对拉帕替尼药物敏感性变化。(2)采用CCK-8法检测拉帕替尼和pan-HER抑制剂AZD8931对NCI-N87生长的影响；采用双因素方差分析方法(Two-way AN OVA)来评价两药的联合效应。采用siRNA基因沉默技术敲减HER3基因,观察HER3沉默是否增加肿瘤细胞对拉帕替尼的敏感性。(3)蛋白质印迹检测HER3旁通路激活诱导HER2阳性胃癌细胞耐药的分子机制。(4)利用免疫组化法检测154例2007-2010年间复旦大学附属肿瘤医院手术切除的胃癌原发灶组织芯片,观察HER3、p-HER3的表达情况。结果：(1)HER2阳性胃癌细胞NCI-N87、SNU-216以及乳腺癌细胞SKBR3的HER3、p-HER3受体表达明显上调。应用细胞因子NRG1激活HER3受体,显著增加拉帕替尼耐药克隆的出现(P<0.0001),利用AZD8931逆转NRG1诱导的拉帕替尼耐药。(2)拉帕替尼和AZD8931对胃癌细胞株NCI-N87的生长抑制作用呈剂量依赖性,两药呈协同作用(P<0.001)。利用siRNA沉默HER3基因,与scrambled siRNA阴性对照相比,显著增加了拉帕替尼对HER2阳性肿瘤细胞杀伤作用(P<0.001)。(3)蛋白印迹显示拉帕替尼可以明显下调HER2阳性肿瘤细胞p-HER2、P-Akt、p-Erk蛋白的表达水平,而对EGFR、p-HER3以及非磷酸化的EGFR、HER2、HER3、Akt、Erk蛋白无明显影响。在胃癌细胞系中,与拉帕替尼相反,HER3激活剂NRG1可以明显上调HER2阳性细胞P-HER3、p-Akt蛋白的表达,在乳腺癌细胞SKBR3中同时上调p-Erk的蛋白表达水平。高剂量的AZD8931联合或不联合拉帕替尼,p-HER3、p-Akt蛋白的表达水平下调更明显,SKBR3细胞中同时伴有p-Erk明显下调。(4)HER2阳性胃癌组织中HER3、 P-HER3的表达明显高于HER2阴性组织(P<0.0001), HER3、p-HER3在HER2阳性组织中的表达率分别为96.3%和81.5%。结论：(1)HER3受体通过激活下游重要信号通路节点p-Akt诱导HER2阳性胃癌细胞对拉帕替尼耐药,对Ras-MAPK通路无影响。(2)阻断HER3受体增加了HER2阳性细胞对拉帕替尼的敏感性,有力的抑制了PI3K-Akt通路的激活。(3)大部分HER2阳性胃癌患者存在HER3旁通路的激活。