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目的：乙酰肝素酶（heparanase, HPA）作为唯一一种内源性D-葡萄糖醛酸内切酶，能够降解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycan, HSPG)。而HSPG是糖胺聚糖的主要组成部分，在肿瘤扩散和转移过程中扮演着不可或缺的角色。HPA通过降解HSPG的硫酸乙酰肝素（heparan sulfate,HS）侧链而破坏了组织的完整性，并且促进多种活性分子（生长因子、细胞因子等）的释放，所以对肿瘤的浸润、转移及肿瘤血管的生成都有着重要的作用。本研究的目的在于筛选获得特异性较好的抗HPA单克隆抗体，通过初步体外实验研究抗HPA单抗与紫杉醇联用后对乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力的影响。为研制抗肿瘤转移的药物奠定基础，为研究HPA在肿瘤发生发展中的作用机制以及在肿瘤诊断、治疗、预后中的作用提供材料。选择紫杉醇与抗HPA单抗联用，为乳腺癌在临床治疗中奠定理论基础。方法：本实验用已制备的原核表达HPA50kDa蛋白质为抗原，免疫BALB/c小鼠，用杂交瘤细胞融合技术制备抗HPA单克隆抗体，经捕获型ELISA和试纸条测定小鼠抗体亚类，用PEG6000沉淀、分子筛层析对抗体进行纯化，通过间接ELISA和Western Blot进行单克隆抗体特异性鉴定。通过MTT法、流式细胞术-PI单染、细胞划痕试验、Transwell法探讨紫杉醇与抗HPA单克隆抗体联用后对乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力的影响。结果：（1）原核表达HPA50kDa蛋白质在经过透析、浓缩及蛋白浓度测定后，作为抗原免疫5只BALB/c小鼠，三次免疫后通过间接ELISA检测，3号和4号小鼠效价较高，达到了达到1:64000以上，选用4号小鼠进行实验。采用细胞融合技术，取4号小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞用PEG融合，通过HAT筛选杂交瘤细胞，融合率约为90%，阳性率约为82%。亚克隆采用的是有限稀释法，筛选出14株能够稳定分泌表达目的抗体的—抗HPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为2A4-2、2B9-2、2C3-2、2C8-2、2F6-2、2G11-2、3B8-2、4B11-3、4D4-2、4E5-2、4G11-3、5C7-2、5F2-2、6D3-2。经捕获型ELISA和试纸条测定后，分泌抗体亚类均为IgM。选择7株细胞（2B9-2、2C3-2、2C8-2、3B8-2、4B11-2、4D4-2、5C7-2）注射小鼠腹腔，制备腹水获得单抗。通过间接ELISA和Western Blot鉴定单克隆抗体特异性，得到特异性较好的3种抗体2C3-2、3B8-2、4D4-2。在纯化过程中，先采用PEG6000沉淀对腹水进行初步纯化，初步纯化后抗体纯度约为80%，再通过分子筛柱进一步纯化，浓缩后蛋白含量为0.116mg/ml。（2）选用纯化后的抗HPA单抗3B8-2，干预乳腺癌细胞（MCF-7细胞、MDA-MB-231细胞）后发现细胞形态发生了明显的改变。单用抗HPA单抗时，对乳腺癌细胞（MCF-7细胞、MCF-7/F5细胞、MDA-MB-231细胞、SK-BR-3细胞）抑制作用最大的是MCF-7/F5细胞，在抗HPA单抗浓度为5μg/ml时的细胞抑制率为22.37%；紫杉醇单用时，对于乳腺癌细胞的抑制作用呈浓度依赖性；将紫杉醇与抗HPA单抗联用后，对于4种乳腺癌细胞的抑制作用都有明显的增强。对于细胞周期，两药联用后MCF-7细胞、MCF-7/F5细胞、MDA-MB-231细胞分别出现了15%、33.7%、53.6%的细胞凋亡。在乳腺癌细胞MCF-7/F5的侵袭能力方面，抗HPA单抗干预组的穿透率为75%，将紫杉醇与抗HPA单抗联用后，穿透率从紫杉醇干预时30%的穿透率降低至20%。与单用抗HPA单抗相比较，具有极显著差异（P<0.01）；与单用紫杉醇相比较，具有显著差异（P<0.05）。结论：（1）本实验筛选出能够稳定分泌高特异性的抗HPA单抗，并且制备出纯度达90%以上的抗HPA单抗样品。（2）抗HPA单抗与紫杉醇联用后，对细胞增殖、细胞侵袭的抑制作用与两药单用时的作用明显增强，抗HPA单克隆抗体可增强紫杉醇抑制肿瘤细胞增殖和侵袭的能力。