论文部分内容阅读
目的通过体内体外实验,探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)在碘酸钠(Sodium iodate,NaIO3+RES)诱导后对人视网膜色素上皮细胞凋亡的抑制作用。方法在体外实验中,选用人视网膜色素上皮-19(Adult retinal pigment epithelium-19,ARPE-19)细胞系,对RPE细胞进行碘酸钠诱导损伤来模拟干性黄斑变性模型。将RPE细胞传代培养分为三组:空白组、碘酸钠损伤组、含白藜芦醇的实验组,并对各组细胞的形态进行观察记录。应用MTT实验检测RES对RPE细胞最佳保护作用的浓度以及最佳浓度下对不同碘酸钠浓度损伤的RPE细胞的保护作用。通过Western blot对各组细胞的凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达情况进行检测。采取Hoechst33342及流式细胞术检测各组细胞的凋亡总量的差别以及凋亡细胞种类之间的差别。而在体内实验中,分别将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组(NaIO3)和实验组(NaIO3+RES)。于鼠尾静脉注射NaIO3后的第1、7、14、21、28天做眼底照相和OCT成像,且取眼球组织做HE染色,观察视网膜各层结构变化。结果在体内实验中:在NaIO3注射第7天,便可见实验组OCT视网膜厚度较模型组厚,RPE层、光感受器及外核层受损程度也较模型组轻。体外实验中:RES在浓度为5μm·L-1下对RPE细胞有较强的保护作用且此浓度下对不同损伤程度的RPE细胞都有较强的保护作用。含RES的碘酸钠损伤组Bax蛋白的相对表达量(0.45±0.07)明显低于于碘酸钠损伤组(0.90±0.09)且差异有统计学意义(P<0.05)同时对与空白对照组而言(0.34±0.06)差异无统计学意义(P>0.05),含RES的碘酸钠损伤组Bcl-2蛋白的相对表达量(0.56±0.14)相对与碘酸钠损伤组(0.24±0.04)有显著的上升且差异有统计学意义(P<0.05),与空白对照组(0.73±0.08)相比差异无统计学意义。Hoechst33342检测结果显示含RES的碘酸钠损伤组凋亡细胞含量明显低于碘酸钠组且在流式细胞术的检测中发现含RES的碘酸钠损伤组和碘酸钠损伤组比较,经过RES预保护的的碘酸钠组无论早期凋亡细胞的数量还是晚期凋亡细胞的数量均较损伤组少。结论该实验证明了RES对碘酸钠诱导损伤的RPE细胞的凋亡具有良好的抑制作用,同时对在碘酸钠模拟的AMD模型中的视网膜损伤有较好的保护作用,对AMD的治疗具有潜在价值。