【摘 要】
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目的：探讨利用腺病毒载体作为炭疽杆菌基因工程疫苗载体的可行性；探索重组腺病毒对雾化的耐受能力；探讨腺病毒活载体疫苗雾化吸入免疫途径的可行性。 方法： 1．PCR扩增PA基因
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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目的：探讨利用腺病毒载体作为炭疽杆菌基因工程疫苗载体的可行性；探索重组腺病毒对雾化的耐受能力；探讨腺病毒活载体疫苗雾化吸入免疫途径的可行性。
方法：
1．PCR扩增PA基因后克隆至质粒pAdTrack-CMV，经与pAdeasy一1同源重组，构建重组腺病毒vAd-PA，转染293细胞，经Western．blot检测表明PA在293细胞中得到表达。
2．重组腺病毒肌肉注射和滴鼻免疫途径免疫BALB／c小鼠，通过ELISA和MTT等实验对免疫鼠的特异性抗体、黏膜免疫反应及细胞免疫应答进行分析。
3．优化重组腺病毒雾化条件，选择最优条件雾化免疫小鼠，通过ELISA和MTT等实验对免疫鼠的特异性抗体、黏膜免疫反应及细胞免疫应答进行分析。
结果：
1．通过酶切鉴定的方法验证，成功构建了重组腺病毒vAd-PA，并用Western-blot的方法验证了PA蛋白在细胞内的表达。
2．重组腺病毒通过肌肉注射和滴鼻的途径免疫小鼠，均能诱导特异的体液、黏膜和细胞免疫应答。表现为血清中IgG升高，肺灌洗液中的IgA升高，以及脾细胞培养上清中的细胞因子浓度有所升高，MMT实验结果显示T细胞增殖程度高于对照组。
3．重组腺病毒雾化途径免疫小鼠，可诱导特异的体液、黏膜和细胞免疫应答。表现为血清中IgG升高，肺灌洗液中的IgA升高，MMT实验结果显示T细胞增殖程度高于对照组。
结论：炭疽杆菌重组腺病毒基因工程疫苗有望发展成为一种新型的基因工程疫苗：雾化吸入免疫途径可考虑作为炭疽杆菌腺病毒活载体疫苗的免疫方式。
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