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博落回是我国重要的中草药材,其主要的有效成分是生物碱。近年来,博落回提取物因其具有抗菌、抗炎、抗氧化和杀虫等生物学特性而广泛应用于畜禽养殖业,并取得了良好的应用效果,但有关博落回提取物对蛋鸡产蛋性能和蛋品质的影响及其机理的研究尚少。基于此,本论文以京白蛋鸡为试验对象,研究饲料中添加博落回提取物对其产蛋性能、蛋品质、卵巢激素水平、肠道健康等方面的影响,初步探明博落回提取物改善京白蛋鸡产蛋性能和蛋品质的机理,为博落回提取物应用于蛋鸡养殖业提供理论基础。试验选取体重、营养状况相近的202日龄的京白蛋鸡270只,随机分为3组,每组90只,每组6个重复,每个重复15只。对照组(CTR):饲喂基础饲粮;博落回-Ⅰ组(McE-Ⅰ):基础饲粮中添加0.6 mg/kg饲料的博落回提取物;博落回-Ⅱ组(McE-Ⅱ):基础饲粮中添加1.2 mg/kg饲料的博落回提取物。预饲期为7天,饲养5周后屠宰采样,分析相关指标,研究结果如下:1.产蛋性能和蛋品质蛋鸡产蛋性能结果表明,与CTR组相比,McE-Ⅰ组平均蛋重、产蛋率显著提高(P<0.05),料蛋比显著降低(P0.05)。蛋品质测定结果表明,与CTR组相比,McE-Ⅰ组显著提高了蛋壳强度、蛋白高度、蛋壳厚度、蛋黄重和蛋黄比率(P0.05)。以上结果表明,添加低浓度博落回提取物(0.6mg/kg饲料)可显著提高京白蛋鸡的产蛋性能和蛋品质,而高浓度博落回提取物(1.2mg/kg饲料)无显著效果。因此,后续试验采集McE-Ⅰ组(博落回提取物添加浓度为0.6mg/kg饲料)样品作进一步分析,并标记为McE。2.卵巢激素水平与CTR组相比,McE显著提高了血清中促卵泡激素(FSH)含量(P0.05)。荧光定量PCR结果显示,McE显著提高了卵巢中雌激素受体α(ESR-α)、雌激素受体β(ESR-β)、促卵泡激素受体(FSHR)、促性腺激素释放激素(GnRH)的mRNA表达水平(P<0.05),显著降低了抑制素(INH)的mRNA表达水平(P<0.05)。以上结果表明,饲料中添加博落回提取物可通过调节卵巢中产蛋相关激素的分泌提高蛋鸡产蛋性能。3.肠黏膜物理屏障功能空肠微绒毛电镜结果显示:McE提高了空肠的微绒毛高度和细胞间连接(紧密连接、黏附连接和桥粒);此外,McE显著提高紧密连接蛋白ZO-1、claudin-1和occludin及粘合蛋白MUC-2的基因表达水平(P<0.05),从而改善了蛋鸡空肠黏膜物理屏障功能。4.抗氧化能力血清抗氧化指标测定结果发现,McE可显著提高谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及总抗氧化能力(T-AOC),并显著降低丙二醛(MDA)活性(P<0.05)。同时,抗氧化相关基因表达水平测定结果显示:McE显著上调空肠黏膜中核因子E2相关因子2(Nrf-2)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、血红素加氧酶1(HO-1)及肝脏中过氧化氢酶(CAT)、SOD、GPx、HO-1等抗氧化基因的表达水平(P<0.05)。以上结果表明,博落回提取物可显著增强蛋鸡机体抗氧化能力。5.凋亡和自噬凋亡相关基因表达结果显示:McE显著下调了蛋鸡空肠黏膜中凋亡相关基因caspase-3、caspase-8、p53、BID等的mRNA表达水平(P<0.05),显著上调了抗凋亡因子Bcl-2的mRNA表达水平(P<0.05)。自噬相关基因表达结果显示:与CTR组相比,McE显著上调了蛋鸡空肠黏膜中自噬基因LC-3、ATG-3的mRNA表达水平(P<0.05),降低了P62的mRNA表达水平(P<0.05)。此外,McE也上调了肝脏自噬基因Pink-1、Parkin、LC-3、ATG-3、ATG-5、ATG-9和BECN-1等基因的表达(P<0.05)。以上结果表明,博落回提取物可显著促进蛋鸡肠道和肝脏细胞自噬、降低凋亡。6.免疫功能细胞因子表达水平结果显示:McE可显著降低空肠黏膜中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-2、IL-8、干扰素γ(IFN-γ)、IL-17、IL-18的mRNA表达水平(P<0.05),显著提高IL-4、IL-10、IL-13的表达水平(P<0.05)。在肝脏中获得了类似结果,显著下调了IL-1β、IL-2、IL-8、IFN-γ的基因表达(P<0.05),上调了IL-4和IL-10的基因表达(P<0.05)。此外,McE显著下调了空肠黏膜中Toll样受体TLR-2、TLR-4、TRAF-6、NF-κB、MAPK及肝脏中TRAF-6和NF-κB的mRNA表达水平(P<0.05)。以上结果表明,博落回提取物可通过抑制NF-κB信号通路降低炎症细胞因子基因表达,提高蛋鸡免疫功能。7.其它血清相关指标McE显著降低了血清中甘油三酯(TG)和葡萄糖(Glu)含量及谷草转氨酶(AST)活性(P<0.05),显著提高了总蛋白(TP)和钙离子(Ca2+)含量及碱性磷酸酶(AKP)活性(P<0.05)。表明饲料中添加博落回提取物显著改善了蛋鸡生化代谢,降低了肝脏损伤。8.盲肠菌群和短链脂肪酸盲肠内容物16s高通量测序结果表明:McE组肠道菌群的ACE、Simpson和PD_whole_tree指数显著高于对照组,肠道菌群α-多样性增加(P<0.05)。基于Bray-Curtis距离的微生物群落主坐标分析(PCoA)表明,两组间差异显著(P<0.05),这与非度量多维标度分析法(NMDS)的结果一致。对两组肠道菌群各个水平的相对丰度结果发现,两组肠道菌群的结构和丰度存在着差异。在门水平上,博落回有提高蛋鸡肠道Cyanobacteria丰度的趋势(P=0.089)。在属水平上,博落回显著提高了Ruminococcaeae_UCG-005的相对丰度(P<0.05),显著降低了Lachnospiraceae的相对丰度(P<0.05)。LEf Se分析结果发现,博落回组富含Helicobacter、Helicobateraceae、Ruminococcaceae_UCG_005、Bacteroridales和Clostridiales_vadin BB60,而对照组富含Lachnospiraceae、Bacteroides和Ruminococus。短链脂肪酸(SCFAs)测定结果发现,McE组盲肠中乙酸(acetic acid)、丙酸(propanoic acid)、丁酸(butyric acid)和异戊酸(isovaleric acid)的含量显著提高(P0.05)。菌群代谢功能预测结果发现:与CTR组相比,McE组氨基酸合成和次级代谢产物生物合成等微生物代谢功能显著提高(P<0.05)。相关性分析结果表明:Ruminococcaceae_UCG-005和SOD活力、FSHR表达水平、丙酸和异戊酸含量呈正相关,与INH水平呈负相关。以上结果表明,饲料中添加博落回提取物可改善肠道组成和结构,提高短链脂肪酸(SCFAs)含量,促进肠道健康。综上所述,饲料中添加0.6mg/kg饲料的博落回提取物可调节肠道菌群并提高蛋鸡自噬、抗氧化抗凋亡、肠屏障和免疫功能,改善蛋鸡肠道和机体健康,促进产蛋相关激素的分泌,进而提高京白蛋鸡产蛋性能和蛋品质。