论文部分内容阅读
Crk家族蛋白是一类广泛表达的接头分子。在细胞受到外部信号刺激后,Crk家族蛋白会形成介导信号转导的复合物。Crk蛋白响应的细胞外信号包括各种促生长和分化因子。CrkII是Crk基因转录产物选择性剪切后产生的主要亚型。CrkII蛋白含有一个SH2结构域和两个SH3结构域。CrkII蛋白介导了酪氨酸磷酸化信号的转导。与CrkII的SH2结构域相互作用的磷酸化酪氨酸蛋白包括粘着斑蛋白、生长因子受体和信号转导复合物中的脚手架蛋白质等。CrkII通过SH3结构域与许多GEF相互作用。例如,CrkII可以与C3G结合激活Rapl/R-Ras,或是与DOCK180相互作用激活Rac。这些信号通路参与调控了细胞粘附、细胞迁移和细胞增殖。
最近的研究发现,有一部分内源性的CrkII蛋白定位于细胞核中。在UV照射细胞后,一部分CrkII蛋白从细胞质转运到细胞核中,促进UV诱导的细胞凋亡。然而,CrkII转运到细胞核中的机制还不清楚。我们在此探讨CrkII蛋白的入核转运机制和在细胞核内的功能。我们在HEK29细胞中表达GFP-CrkII-GFP的融合蛋白,并研究GFP-CrkII-GFP蛋白的亚细胞定位。在HEK293中,野生型的GFP-CrkII-GFP在细胞核和细胞质中都有定位。然而,当CrkII的第154位赖氨酸、第155位赖氨酸、第178位赖氨酸和第179位精氨酸突变为甘氨酸后,该突变型的GFP-CrkII-GFP在细胞核内的量明显减少。我们还发现,在HEK293细胞中过表达Lys154、Lys155、Lys178和Arg179突变型的GFP-CrkII-GFP会诱使24%的细胞产生多分叶状细胞核。多分叶状细胞核是血液粒细胞的独特细胞核形态,并且常见于特定类型的白血病细胞中。在HEK293细胞中,突变型的CrkII蛋白诱发的多分叶状细胞核依赖于tubulin细胞骨架的功能。用nocodazole处理细胞会抑制突变型CrkII蛋白诱发的细胞核形态改变。这些数据表明,CrkII中的Lys154、Lys155、Lys178和Arg179对其细胞核定位具有重要作用。Lys154、Lys155、Lys178和Arg179突变后的CrkII更多的定位到细胞质中,并且会诱导HEK293细胞产生多分叶状细胞核。