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本实验室研究重点在于建立一个广源的高质量微生物天然产物库,同时基于该库的特点,基于高通量技术建立或优化多种活性筛选模型对该样品库进行生物活性筛选,以期高效率、低重复地寻找具有潜在药用市场前景的新结构活性化合物。本研究是在微生物天然产物库及其上游菌种库构建的基础上,在菌种库多样性评价以及菌株去重复化分析的过程中,对从中发现的放线菌新分离株进行多相分类研究。所涉及到的放线菌菌株MS498、MS426和RA45等分别来源于本海洋环境样品和沙漠贫瘠土壤样品。
16S rRNA基因序列比对分析结果表明RA45、MS498等菌株属于假诺卡亚目(suborder Pseudonocardineae),菌株MS426属于小单孢亚目(Micromonosporineae)中的瘤孢菌属(又名疣孢菌属,Verrucosispora)。根据Stackebrandt和Ebers等人于2008年更新的“黄金标准”--与有效发表的模式菌株16S rRNA基因序列相似度小于98.7%菌株无需做全基因组DNA杂交即可断定为新种,以上菌株均为独立的新的分类学种;根据进一步的16S rRNA基因系统进化分析,判断RA45为假诺卡亚目假诺卡菌科(Pseudonocardiaceae)中的一个潜在的新属;通过对新菌株RA45和MS498与其它有效发表假诺卡模式菌株的系统发育分析,发现假诺卡亚目的束丝放线菌科的进化枝完全落在了它的姊妹科(sister family)假诺卡菌科的进化枝中。本文严格按照多相分类的标准程序完成了上述菌株的部分形态学、生理生化、化学分类以及分子分类的特征描述以及数据分析,并通过对于16S rRNA基因数据的深入发掘(16S rRNA基因系统树分析、可变区二级结构分析以及特征性核苷酸分析等)证明束丝放线菌科(Actinosynnemataceae)作为一个科的分类地位存在争议,提出对于该亚目有进行再分类(reclassification)的需要。同时,本文通过对假诺卡亚目的比较形态学(comparative morphology)分析,进而对公共数据库中已全基因组测序菌株(Saccharopolyspora erythraea NRRL2338等)的比较基因组学分析,发现了11种未知功能的蛋白质可能是该亚目的特征性蛋白质,对其序列的系统学分析是对该亚目的进行再分类研究重点。
本文除应用经典的技术路线完成若干天然产物库菌种库中疑似新菌的多相分类和描述工作,同时对于在新菌株描述过程中发现的现有放线菌分类体系中存在的问题进行了深入剖析,首次将特征性蛋白质分析的技术路线引入放线菌亚目级别的分类单位再分类的工作,并通过对现有数据库中相关数据的分析对该方法的可行性进行评估,为进一步的再分类工作提供指导。