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目的:多发性硬化是中枢神经系统自身免疫反应介导的炎性神经退行性病变,中医将其归属于“痿证”,本病症状多表现为感觉异常、肢体无力和视力障碍等,因其好发于青年,临床表现复杂多变,致残率高,且缺乏特异性辅助诊断指标,因而在诊疗上存在难点。本文从理论研究和实验研究两方面对MS的病因病机理论和发病机制开展研究。理论研究方面,从“脑髓”理论角度探讨多发性硬化的发病机理,并通过文献资料进行治疗组方用药规律挖掘,阐发了肾虚精亏,痰湿热瘀,化生浊毒,阻滞脑络而发的基本病机特点,并产生了“益肾、解毒、通络”的治法思路,接着进行了网络药理学靶点探究和实验研究。实验研究方面,星形胶质细胞在多发性硬化中受损神经元的修复以及轴突再生中发挥重要作用,如何减轻多发性硬化神经损伤以及胶质瘢痕的形成、促进修复等是神经再生领域关注的重点问题。而星形胶质细胞是中枢神经系统炎症因子释放、胶质瘢痕形成以及神经营养因子分泌的重要环节。基于此,本研究通过炎性环境诱导星形胶质细胞活化,探究益肾解毒通络法是否通过β抑制因子（β-arrestin1,Arrb1）对腺苷A1膜受体（Adenosine A1-R,A1AR）和细胞蛋白激酶A/环腺酸苷酸反应元件结合蛋白（protein kinase A/cAMP response element binding protein,PKA/cAMP/CREB）信号转导通路发挥而作用,为益肾解毒通络法治疗多发性硬化的反应性星形胶质化、炎性微环境机制研究提供理论依据。方法:1.以“多发性硬化”为主题,统计CNKI近10年中治疗多发性硬化的中药复方,再经中医传承辅助平台（TCMISS V2.5）对用药频次、性味归经、潜在药物组合等进行数据挖掘。2.利用网络药理学方法对益肾达络饮治疗多发性硬化进行分析。应用TCMSP数据库和GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、Drugbank数据库获取益肾达络饮的活性成分、靶点和多发性硬化的靶点,并取交集,获得潜在治疗靶点。利用cytoscape3.8.0、STRING、CytoNCA、R软件,得到活性成分-靶点基因网络和PPI网络、GO、KEGG富集分析结果,并进行分子对接验证。3.首先从乳鼠中提取原代星形胶质细胞,并进行免疫荧光染色胶质纤维酸性蛋白（Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP）鉴定,CCK-8法检测脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）对星形胶质细胞细胞生长活性影响,通过Elisa判断星形胶质细胞IL-1β、TNF-α的表达及分泌,通过蛋白印迹法检测GFAP和GDNF表达,建立LPS诱导的炎症模型。4.克隆构建慢病毒沉默Arrb1基因（RNAi-Arrb1）表达,蛋白印迹法检测Arrb1与组蛋白H4蛋白表达情况。5.体外通过LPS刺激原代培养的星形胶质细胞,利用免疫荧光法、蛋白印迹法检测GFAP、PKA/cAMP/CREB、GDNF、Arrb1、组蛋白H4等蛋白表达。结果:1.中药复方治疗多发性硬化的文献挖掘中补气药占比最多,性味归经结果中,温性、甘味、归肝脾肾胃经药物占比最多,在用药模式和核心药物组合中,注重益气养血、滋补肝肾、健脾化痰、温经通络之法。2.筛选出益肾达络饮活性成分115种,预测靶点225个,多发性硬化靶点8098个,交集靶点199个。在生物学过程主要集中在炎症反应、氧化应激反应等,与IL-17信号通路、TNF通路关系密切,分子对接结果表明,核心活性成分与核心靶点之间具有较强的结合活性。3.原代星形胶质细胞形态学观察:原代培养的星形胶质细胞呈聚集性生长,边缘不易辨别,为多角形,后逐渐开始铺展,细胞体增大,部分细胞突起伸长,呈梭形,伪足增多,细胞更加透明,胶质细胞基本满瓶底,3代星形胶质细胞可以用于接下来的实验。免疫荧光鉴定:星形胶质细胞骨架蛋白GFAP显示阳性细胞数为95%以上,可以用于接下里的实验。造模:1μg/ml LPS 24h诱导星形胶质细胞活化,与空白组相比,LPS对星形胶质细胞活性有增长趋势,但没有显著差异（P＞0.05）。LPS可以升高星形胶质细胞释放炎症因子IL-1β、TNF-α（P＜0.01）,促进GFAP蛋白表达（P＜0.05）,降低GDNF表达（P＜0.05）。益肾达络饮高剂量组能够明显降低LPS诱导的星形胶质细胞IL-1β、TNF-α的表达（P＜0.01）,降低GFAP蛋白水平表达（P＜0.05）,升高GDNF蛋白表达水平（P＜0.01）。4.Arrb1在星形胶质细胞的胞浆和胞核内均有分布,炎性环境中,Arrb1在核内分布的增加,Arrb1蛋白表达增多,具有显著性差异（P＜0.05）。益肾达络饮可能通过降低Arrb1调控组蛋白H4表达（P＜0.05）。5.经验证,shRNA-Arrb1慢病毒能降低星形胶质细胞Arrb1表达（P＜0.05）。shRNA-Arrb1慢病毒沉默星形胶质细胞Arrb1后,可降低组蛋白H4表达（P＜0.05）。益肾达络饮对shRNA-Arrb1慢病毒沉默星形胶质细胞组蛋白H4表达没有明显影响。6.炎性环境中,星形胶质细胞cAMP、PKA、p-CREB蛋白水平表达水平下降（P＜0.05）,A1AR表达下降（P＜0.05）;益肾达络饮高剂量组能升高cAMP、PKA、CREB、p-CREB、A1AR蛋白表达结论:1.中药复方治疗多发性硬化在用药模式和核心药物组合中注重益气养血、滋补肝肾、健脾化痰、温经通络之法。2.通过网络药理学分析得出益肾达络饮通过MAPK、AKT、TNF等关键靶点参与PI3K-AKT、MAPK、IL-17、TNF-α、camp等多条通路发挥抗炎、调节免疫应答作用。3.体外研究发现益肾达络饮可改善星形胶质细胞活化,降低炎症因子IL-1β、TNF-α释放,降低GFAP表达,升高GDNF表达,改善胶质化反应。4.益肾达络饮可能通过降低活化的星形胶质细胞中Arrb1,进而影响组蛋白H4表达,进而影响组蛋白表观遗传修饰。5.益肾达络饮能促进星形胶质细胞PKA/cAMP/CREB信号转导通路表达。