目的肥胖症与心脑血管疾病、2型糖尿病、血脂紊乱、呼吸睡眠暂停综合症等疾病的发生有密切的关系,已经成为危害人类健康的重要疾病。过多的热量摄入并以甘油三脂的形式存储在白色脂肪细胞内是肥胖发生的关键。前脂肪细胞的增殖和分化是成熟脂肪细胞形成的核心,从前脂肪细胞分化成为成熟的脂肪细胞的过程十分复杂,机体内多种细胞因子和激素在脂肪细胞成熟过程中都有调节作用。本课题组前期实验发现红花的主要活性成分羟基红花黄色素A对前脂肪细胞分化到脂肪细胞过程中的关键转录因子PPARγ具调节作用,提示羟基红花黄色素A可能对脂肪细胞的生物学功能发挥影响。本课题旨在研究羟基红花黄色素A对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化及细胞内脂肪酸合成酶和激素敏感性脂肪酶两种脂代谢调节酶的影响,为进一步探讨HSYA在脂肪细胞内脂质代谢方面新的作用打下基础。方法1.以MTT法观察羟基红花黄色素A对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响。2.使用油红O染色定量的方法以及甘油三酯GPO-POD酶法测定观察脂肪细胞的成熟,以反映羟基红花黄色素A对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的影响;3.应用实时荧光定量PCR和双萤光素酶报告检测系统分别从mRNA水平和启动子活性水平研究羟基红花黄色素对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂代谢调节酶脂肪酸合成酶和激素敏感性脂肪酶的影响。结果1.羟基红花黄色素A对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖有抑制和增强两种作用。其对于细胞增殖的显著影响从24小时开始;在24至96小时间,0.01、0.1、1、10mg/L羟基红花黄色素A刺激组均对3T3-L1前脂肪细胞增殖起显著抑制作用,且作用无明显剂量依赖关系,而100 mg/L组仅在24小时对增殖有显著抑制作用,其后的48、72及96小时测定与对照无显著差别。至120小时时,羟基红花黄色素A对细胞增殖均呈促进作用,且促进随浓度增加而增强。2.羟基红花黄色素A对3T3-L1前脂肪细胞分化为脂肪细胞有抑制和增强两种作用。0.01、1 mg/L羟基红花黄色素A组呈现先抑制后促进的现象,在分化的第4、8、12天,HSYA组细胞内脂质含量显著降低,且降低具剂量依赖关系;而在分化第16天时,细胞内脂质含量较对照组升高,但无统计学差异。而100 mg/L羟基红花黄色素A组细胞内脂质含量则在分化第4天及16天时较对照组显著增多。3.羟基红花黄色素A对于小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂代谢调节酶脂肪酸合成酶和激素敏感性脂肪酶主要起促进作用。结论1.羟基红花黄色素A对于3T3—L1前脂肪细胞增殖的影响随不同浓度、不同作用时间有所不同。主要趋势为在一定浓度范围内的羟基红花黄色素A刺激作用可在一定时间内抑制前脂肪细胞的增殖,但随着细胞培养时间的延长、细胞密度增加,逐渐表现为促进细胞增殖。2.羟基红花黄色素A对于3T3—L1前脂肪细胞分化的影响随不同浓度、不同作用时间有所不同。即0.01及1 mg/L羟基红花黄色素A组在3T3—L1前脂肪细胞诱导分化过程中主要起抑制分化作用。而100 mg/L羟基红花黄色素A组则主要表现为促进分化。3.羟基红花黄色素A对于小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程中脂代谢调节酶脂肪酸合成酶和激素敏感性脂肪酶都主要起促进作用,但对于激素敏感性脂肪酶的促进作用大于脂肪酸合成酶,可能是导致分化过程中脂质合成少于对照组的原因。