目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是老年人群中最常见的神经退行性疾病,持续过度的炎症反应是导致AD神经元损伤的主要因素之一。受到Aβ斑块刺激的小胶质细胞可诱发NLRP3炎症小体激活,促进其M1型极化发挥促炎作用并降低对Aβ斑块的吞噬和清除作用,加重AD的病理改变。NLRP3蛋白是NLRP3炎性小体组装及合成的限速蛋白,但是目前尚不清楚可参与调控NLRP3表达的蛋白种类。本文通过免疫共沉淀联合质谱的技术手段,筛选出p62蛋白可能与NLRP3蛋白存在相互作用。由于p62可识别泛素化蛋白并通过自噬途径参与蛋白降解,因此本文旨在探究p62是否与泛素化修饰的NLRP3存在相互作用并通过自噬溶酶体途径参与其降解,以及对小胶质细胞极化状态和AD病程的影响。方法:1)体内实验中,为了探究NLRP3敲除对AD小鼠不同发病阶段的认知功能以及病理改变起到的作用,本课题组制作了 NLRP3敲除的5XFAD小鼠模型,将小鼠模型分为按照2.5月龄和9.5月龄分成WT、NLRP3KO、5XFAD、5XFAD/NLRP3KO组,应用开放旷场实验、新物体识别实验、Y迷宫实验、水迷宫实验评价各组小鼠的认知功能;并对小鼠小胶质细胞形态、Aβ斑块沉积情况、神经元形态、脑组织超微结构进行观察;体外实验中,为了探究NLRP3的表达水平对小鼠胶质瘤细胞（BV2细胞）的AD炎症模型产生的影响,通过给予BV2细胞LPS+Aβ1-42寡聚体刺激模拟AD炎症模型,应用蛋白免疫印记和酶联免疫吸附实验验证AD体外炎症模型造模是否成功,并采用式细胞技术检测AD炎症模型下BV2细胞的极化状态;通过慢病毒转染的方式对NLRP3蛋白的表达进行上调/下调,通过流式细胞技术检测小胶质细胞的极化状态。2)为寻找出可以调控NLRP3表达的互作蛋白,本文应用免疫共沉淀联合质谱的技术手段,将体外AD炎症模型BV2细胞进行NLRP3蛋白的免疫共沉淀实验,筛选可能与之存在相互作用的蛋白;利用co-IP及免疫荧光共定位的方法验证蛋白p62与NLRP3蛋白之间的相互作用关系,通过计算机3D算法模拟构建p62与NLRP3的结合位点示意图;为了探讨p62对NLRP3的表达调控影响,应用慢病毒载体将目标基因转染至BV2细胞,通过3-MA刺激BV2细胞构建自噬溶酶体抑制模型,应用蛋白免疫印迹、qRT-PCR、流式细胞等方法进行实验验证。3)最后,应用蛋白免疫印迹、免疫荧光、RNA-seq等方法对p62参与的自噬通路相关基因的表达情况进行探究。结果:1)表型验证中,降低NLRP3的表达可降低小胶质细胞M1型极化状态,通过减少5XFAD小鼠模型中Aβ斑块沉积的方式,减少神经毒性即神经元损伤,改善AD的认知功能损害。2)机制探究结果中,co-IP结合质谱分析表明,p62可能与NLRP3相互作用,通过内源性和外源性co-IP和免疫荧光共定位进行了验证,p62可识别K63泛素修饰的NLRP3发生蛋白互作,并通过计算机3D算法模拟出前十种蛋最有可能出现的蛋白互作位点;p62的表达可促进NLRP3的降解,且NLRP3的降解是通过自噬-溶酶体途径完成,并减少NLRP3炎症小体的形成,减缓小胶质细胞向M1型极化;3)与p62相关的自噬途径在AD体外炎症模型中发生激活,其上游通过抑制Akt-mTOR途径激活自噬通路,下游自噬相关蛋白LC3A/B和LAMP-1的表达在AD炎症模型中增加。结论:p62可识别并结合K63-泛素化修饰的NLRP3蛋白,通过自噬溶酶体途径对其降解,抑制NLRP3炎症小体的组装合成,减少小胶质细胞M1型极化,维持小胶质细胞对Aβ斑块的识别与吞噬降解能力,从而改善AD的认知功能。