论文部分内容阅读
脑干胶质瘤好发于儿童。弥散性原发脑干胶质瘤约占儿童脑干胶质瘤的80%,病理多为高级别浸润性生长胶质瘤,预后非常差(总生存期仅7～14个月),是脑肿瘤儿童患者致死的最主要原因。而脑干被称为是生命中枢,任何大小的手术都会造成其不同程度的损伤,引起相应的功能障碍,甚至危及生命。至今脑干胶质瘤的治疗对于神经外科仍是一具大挑战,必须辅助其它治疗手段。本课题将冰片修饰的脑干靶向性和R8d GR肽的肿瘤靶向性相结合,构建二级靶向生物可降解纳米系统,共同包载肿瘤微环境调控药物姜黄素(Curcumin,Cur)和化疗药顺铂(Cisplatin,Cis),以期提高对脑干胶质瘤的治疗效果。冰片的开窍作用将药物经由鼻腔给药递送入脑干部位,R8d GR肽使进入脑干的药物进一步浓集于胶质瘤细胞,姜黄素可以调控肿瘤微环境,从而能有效促进纳米粒渗透到肿瘤内部,提高顺铂的抗脑干胶质瘤效果并降低副作用。姜黄素/顺铂共载药冰片/R8d GR共修饰MPEG-PLGA纳米给药系统将为脑干胶质瘤的治疗提供一种新的非侵入性策略,亦为中西药结合靶向肿瘤治疗提供一种新的研究思路,对弥散性原发脑干胶质瘤的靶向治疗具有重要的科学意义。本文第一章进行姜黄素/顺铂共载药冰片/R8d GR共修饰PEG-PLGA纳米粒的制备。采用乳化-溶媒挥发法制备姜黄素/顺铂共载药冰片/R8d GR共修饰PEGPLGA纳米粒(BoR-Cur/Cis-NP),考察了Cur投药量、Cis投药量和转速对所制得纳米粒粒径和载药量的影响。最终确定的处方工艺制得BoR-Cur/Cis-NP纳米粒的粒径为156.25±14.21 nm,Zeta电位在-12 m V左右;通过HPLC和ICP-MS测得Cur和Cis的载药量分别在0.8%和0.4%左右,包封率在58%和44%左右。本文第二章对制得的Cur/Cis-NPs和BoR-Cur/Cis-NP进行质量评价。结果表明,二种纳米粒形态圆整,大小均一,呈现高斯分布。BoR-Cur/Cis-NP的Zeta电位为-12.51±0.78 m V,其中Cur/Cis包封率为58.34±2.79/44.67±3.21%,Cur/Cis的载药量为0.87±0.07/0.43±0.06%;蛋白定量结果证实纳米粒表面确实连接有R8d GR肽,BoR-Cur/Cis-NP纳米粒上R8d GR肽的接枝率为74.33±7.53%。上述结果表明,制备的BoR-Cur/Cis-NP纳米粒具有均匀的粒径分布,Zeta电位结果表明纳米粒具有一定电荷稳定性,其载药量也满足本实验要求。本文第三章进行了BoR-Cur/Cis-NP协同抗脑干胶质瘤作用的体外研究。首先建立了模拟微环境的脑干胶质瘤的体外模型,采用CCK-8法研究了姜黄素对GL261细胞顺铂耐药性的影响。结果表明姜黄素作用于DITNC-1后产生的条件培养基可以显著抑制GL261细胞对顺铂的耐药性。且筛选出其最佳协同比为25:1(Cis/Cur)。体外GL261肿瘤抑制实验结果证实,与顺铂单独给药或Cur/Cis联合给药相比,载有最佳协同比例Cis/Cur的BoR-Cur/Cis-NP具有更好的协同抗脑干胶质瘤作用。本文第四章进行了BoR-Cur/Cis-NP协同抗脑干胶质瘤作用的体内研究。首先确定并验证了小鼠GL261脑干胶质瘤模型的建立方法。随后建立了Dir体外测定方法,制备了载Dir的四种纳米粒Dir-NPs,Bo-Dir-NPs,R8d GR-Dir-NPs,BoR-Dir-NPs,并通过小动物活体成像对四种纳米粒鼻腔给药后体内靶向性能进行初步研究。结果表明纳米粒经鼻腔给药后,可以通过三叉神经进入脑干,且双修饰的纳米粒脑部靶向性最好。体内药效学实验结果表明,与Cis溶液组和Cur/Cis混合溶液剂组相比BoR-Cur/Cis-NP能显著延长GL261脑干胶质瘤模型小鼠的生存周期,具有更好的协同抗脑干胶质瘤作用。