【摘 要】
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葡萄是我国栽培面积较大、经济效益较高的主栽果树之一,但大部分栽培品种抗寒性差,在我国北方地区冬季需埋土防寒,这严重制约了我国葡萄产业的发展。因此培育出能够适应寒冷气候的葡萄新种质是我国育种工作者的重要任务之一。本试验以‘红地球’ב双优’（RS）,‘霞多丽’ב北冰红’（CB）,‘赤霞珠’ב左优红’（CZ）三个山欧葡萄杂交F1代群体的休眠芽为试材,采用差热分析法对葡萄休眠芽的抗寒性进行鉴定,结合
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葡萄是我国栽培面积较大、经济效益较高的主栽果树之一,但大部分栽培品种抗寒性差,在我国北方地区冬季需埋土防寒,这严重制约了我国葡萄产业的发展。因此培育出能够适应寒冷气候的葡萄新种质是我国育种工作者的重要任务之一。本试验以‘红地球’ב双优’（RS）,‘霞多丽’ב北冰红’（CB）,‘赤霞珠’ב左优红’（CZ）三个山欧葡萄杂交F1代群体的休眠芽为试材,采用差热分析法对葡萄休眠芽的抗寒性进行鉴定,结合实验室前期构建的遗传图谱进行QTL定位,并结合转录组测序数据进行葡萄抗寒候选基因的筛选,以期为将来葡萄抗寒性抗性育种提供理论参考。主要结果如下:1.本试验以三个山欧葡萄杂交F1代群体休眠芽为试材,采用差热分析法对葡萄休眠芽的抗寒性进行鉴定,并对其进行遗传规律分析,结果表明,试验群体表型均呈正态分布,葡萄抗寒性呈现数量遗传的特点,且在各群体中分离出了一定比例的超高抗寒性单株。2.通过2019年和2020年葡萄休眠芽的抗寒性表型数据,结合实验室前期构建的遗传图谱进行QTL定位,共定位到14个与葡萄抗寒性相关的QTL位点,分布在LG2,LG3,LG4,LG6,LG9,LG14,LG15,LG16,LG17号染色体上。发现了4个不同年份间稳定的QTL位点,其位于LG2号染色体上和LG3号染色体上。3.对自然越冬条件下不同时期的亲本的休眠芽进行转录组测序,共筛选到15个可能与葡萄抗寒性相关的候选基因,并对其进行q RT-PCR荧光定量验证,其中12个抗寒候选基因与转录组测序结果完全一致,另3个抗寒候选基因与转录组测序结果基本一致。4.在QTL定位区间内,结合转录组数据分析,筛选到Vitvi02g00774（钙调蛋白）、Vitvi02g00919（E3泛素连接酶）两个可能与葡萄抗寒性相关的候选基因,并利用q RT-PCR技术对自然越冬条件下不同时期的6个亲本进行了表达模式分析,结果显示,Vitvi02g00774基因的表达模式与葡萄抗寒性呈正相关,Vitvi02g00919基因的表达模式与葡萄抗寒性呈负相关。5.本试验对Vitvi02g00774（钙调蛋白）、Vitvi02g00919（E3泛素连接酶）、Vitvi09g00044（CBF1）基因进行克隆,经过序列比对分析发现,不同葡萄品种的Vitvi02g00919和Vitvi09g00044的CDS序列没有差异,Vitvi02g00774的CDS序列在不同葡萄品种中存在差异。6.本试验根据Vv CML基因第148位核苷酸发生C到T的等位变异,开发了葡萄抗寒分子标记Vach1,并在8个不同葡萄品种和8个葡萄杂交F1代中得到了验证。
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