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HLA—G分子主要高表达在母胎界面的绒毛外滋养层细胞(extravillouscytotrophoblast，EVT)，而这些细胞表面不表达HLA—A、B及HLAII类分子，提示，HLA—G分子在维持正常妊娠中发挥重要作用。结构上，HLA—G与经典HLAI类分子(classical class I gene，HLAIa)相似，但HLA—G分子还具有以下特点：
(1)正常组织分布有限；(2)初始转录物差异剪接；(3)多态性有限；(4)独特的启动子序列。独特的启动子和体内正常组织的选择性分布，提示HLA—G与HLAIa分子存在不同的表达调控机制。对此作深入研究有助于理解该分子在生理、病理过程中所起的重要作用。
HLA—G分子的表达调控主要有转录水平的调控和转录后水平的调控。已有研究证实：HLAIa基因启动子区3个保守的调控序列在HLA—G基因中都分别发生核苷酸的突变和缺失，导致NFKB、IFN—γ和CIITA皆不能诱导HLA—G分子的表达，提示，HLA—G基因存在某些特异的调控机制。DNA甲基化是转录水平调控基因表达的重要机制之一，可能对HLA-G基因的表达调控也有作用。14bp缺失多态性是HLA—G基因非编码区的多态性之一，可能参与HLA—G分子的转录后调控，是近年的研究热点之一。
本课题分别围绕甲基化调控HLA—G分子的表达和14bp缺失多态性在病理性妊娠中的作用进行初步研究，主要内容包括：
第一部分为了研究DNA甲基化在HLA—G基因表达调控中的作用，我们分别以3株不表达HLA—G分子的细胞(JAR、LCL 721．221和K562)和2株表达HLA—G分子的细胞(T2和JE6—3)为模型，应用亚硫酸盐修饰DNA测序的方法检测了HLA—G基因启动子区甲基化状态与HLA—G分子表达之间的关系。结果发现：JAR、LCL 721.221和K562细胞的HLA—G基因启动子区皆呈现高度甲基化状态，而T2和JEG一3细胞的甲基化程度较低，3株不表达HLA—G分子的细胞经甲基化酶抑制剂5一氮杂脱氧胞苷(5一ACa一2<,>deoxycytidine，5一AC)诱导后，HLA—G基因启动子区的甲基化程度明显降低，同时伴随着HLA—G在mRNA水平和蛋白质水平的重新表达。提示，HLA—G基因启动子区甲基化是调控该分子表达的重要机制之一。
第二部分HLA-G分子维持母胎耐受的一个重要的机制就是该分子可以与NK细胞抑制性受体KIR2DL4、ILT2和ILT4等结合，抑制NK细胞对靶细胞的杀伤。第一部分的实验证实，DNA甲基化酶抑制剂5-AC可诱导K562细胞表面表达HLA-G分子，所以，本部分研究5-AC诱导表达的HLA-G分子对NK92细胞杀伤功能的影响。结果显示：5-AC诱导表达的HLA-G分子与组成性表达的HLA-G分子一样可显著抑制NK92细胞对靶细胞的杀伤。
第三部分第一部分的实验证实，DNA甲基化可调控细胞系中HLA-G分子的表达。本部分，我们收集了18例正常妊娠行人工流产者和11例不明原因习惯性流产患者(Recurrent Spontaneous Abortion，RSA)的绒毛，分离绒毛外滋养层细胞，应用realtime RT-PCR和流式细胞术对HLA-G分子在两组间的表达水平进行比较。在此基础上，我们分别检测了两组标本启动子区的甲基化状态，进一步研究甲基化机制在绒毛组织HLA-G分子差异表达中的作用。realtime RT-PCR和流式细胞术结果显示：与正常对照组相比，RSA患者组的HLA-G在mRNA水平和蛋白质水平的表达皆显著降低(p=O.0183；p=O.0232)。甲基化分析结果显示：ATG上游约450bp的启动子区可能由两部分组成，其中第二部分596～775位内的12个CpG位点的甲基化状态可能在调控绒毛组织HLA-G基因的表达中具有重要作用。相对于正常对照组，RSA患者组中该区域内的CpG位点的甲基化程度有增高趋势。
第四部分第三部分的实验证实，RSA患者组HLA-G分子的表达水平显著低于正常对照组。前者HLA-G基因启动子区的甲基化程度有增高趋势可能与此有关联，那么，14bp缺失多态性在两组间是否也有差异呢?本部分，我们比较了14bp缺失多态性在RSA患者组和正常对照组之间的差异。我们还检测了妊娠高血压综合征患者(Pregnancy Induced Hypertension，PIH)的14bp缺失多态性，进一步探讨其在病理性妊娠中的作用。结果显示：与正常对照组相比，RSA患者组14bp缺失杂合子(-14bp／+14bp)的基因型频率显著增高(x<2>=4.7690，p=0.0290)。提示，HLA-G基因14bp缺失多态性可能与不明原因习惯性流产有关联。
启动子区甲基化和14bp缺失多态性可能分别在转录水平和转录后水平调控HLA-G基因的表达，本课题旨在通过上述研究探讨这二者在妊娠中的作用。这不仅对揭示病理性妊娠的发病机制有重要意义，而且可能为临床上肿瘤、自身免疫病、