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本研究以富含5-HT2B受体的大鼠胃底平滑肌细胞为模板，观察了二氢吡啶类钙拮抗剂2，6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-1，4-二氢-3，5-吡啶二羧酸-3-甲酯-5-正戊酯（Mn9202）、拉西地平（lacidipine）对5-HT2B受体功能的影响，并对其影响机制进行了较为深入的研究。1.5-HT在大鼠胃底平滑肌细胞中对钙离子的调节机制 实验中选用单细胞Ca2+时空变化为指标，研究了5-HT在大鼠胃底平滑肌细胞中对钙离子的调节机制。结果表明，在大鼠的胃底平滑肌细胞，5-HT激动了5-HT2B受体，通过CICR机制引起的[Ca2+]i的升高，且这一作用受到G蛋白、PLC和PKC的调控。2.二氢吡啶类钙拮抗剂Mn9202的抗5-HT的作用 通过离体收缩实验，观察了二氢吡啶类钙拮抗剂Mn9202对5-HT收缩胃底平滑肌的影响，结果发现，Mn92021、10μmol/L孵育后，使5-HT的量效曲线右移，且剂量依赖性地使最大效应分别降低至原来的75％±1.8％和55％±3.2％；在无钙条件下，Mn92021μmol/L使5-HT的量效曲线右移，至3mmol/L，最大效应降低为原来的18％。然后在最大效应处加入同等浓度的Ca2+，胃底条收缩加强，上升为原来 ＄op14Ltf4tyf6＃4 的60O：使用in 二O／L Mn9202孵育30min，再加入in mol／Lmiaserln， 不再使5杉T的量效曲线右移，表明在胃底平滑肌，钙桔抗剂Mn9202 对5爿T有一种不可逆的桔抗作用。 免疫组化结果显示，培养胃底平滑肌细胞内 5－HT、TH和 5－HTR 均呈阳性反应，经图象分析后，阳性物质的相对含量分别为 0刀31土 0刀09，0．058土0．007和0刀62土0刀15；Mn9202 和InCldIPIPe孵育24h 后，阳性物质的相对含量均显著减少，分别为0，023士0．006川．006士 0刀02，0刀34土0刀13／0刀43土0刀05和 0刀49上0．015／0．051 to．013，与溶 剂对照组比较，均有统计学意义（WO．01）。5爿T受体桔抗剂赛庚定 使培养胃底平滑肌细胞内 5．HT、TH的相对含量减少，分别为 0．0 11 土 0．007和 0．046土 0．015但对 5－HTR无显著影响。 5叫T受体mRNA原位杂交结果显示，培养的大鼠胃底平滑肌细胞 均含有较强的5＊T受体mRNA杂交信号，经Mn9202和lacidipine孵育 24h后，5十T受体mRNA的杂交信号明显减弱，但mianserin作用的 SHT受体mRNA的杂交信号与对照组相比无明显差异。 Western杂交结果显示，各组 5．HTR的电泳区带出现在 45 KD， 对照组显示了强阳性信号，而lacidipine和Mn9202组的杂交信号比较 弱。以上实验提示，钙桔抗剂对抗5叫T的收缩胃底平滑肌的作用除与 抑制外钙内流有关，还与抑制5十T受体的表达有关。 3．二氢毗陡类钙桔抗剂对5．HT引起的细胞内钙信号变化的彤响 Mn9202（0．in mol／L，in mol／L，10 u mol／L）呈剂量依赖性地 抑制5十T升高胞内＊ay］的作用。使用激光共聚焦的线形扫描技术观 察至，10 u mo 1／L Mn9202预处理细胞后，再加入 5－HT，Ca‘”spark的 发生频率减少了 56％，振幅减少了 60％；Lacidipine可使 10 v mol／L 5爿T引起h”spark的发生频率减少 50％，振幅减少约 50％。二者对 半峰时程都无显著性影响。表明在胃底平滑肌二氢毗促类钙桔抗剂能 －4－ ＄opt4kf4tyf6kl 够对抗5－HT促ryanodne受体厂放的作用。 4．H氢R比睫类钙桔抗剂对抗5．HT引起的胃底平滑肌细胞的增殖及其 机制 细胞增殖实验表明，高浓度（in mol几）的钙桔抗剂 Mn9202和 lacidipine作用24h后，能够有效地抑制大鼠胃底平滑肌细胞的生长和 DNA的合成，但较低浓度的Mn9202和hcidipine对细胞生长和DNA 合成无显著影响。针对这一现象，我们在实验中观察了二氢毗唆类钙 桔抗剂对与 5－HT犯受体增殖有关的信号分子叩4厂2 mapk和 PKC的影 响，结果显示，与5爿T相比钙桔抗剂Mn9202和lacidipine能够有效 地减少胃底平滑肌细胞中MAPK阳性细胞数，并使胞浆和胞核中的阳 性染色减弱：通过P＊C比活性的测定实验发现，5－＊V10卜md几琼 够促进培养胃底平滑肌细胞PKC由胞浆向胞膜的转移，而经Mn9202 和 lacidipine（10 u mol／L）处理细胞后，5－HT（10 u mol／L）的促 PKC从胞 浆向胞膜的转移的作用被取消。以上结果表明二氢毗唆类钙桔抗剂通 过阻断胃