E. coli BL21/pET28a-cr发酵废水资源化利用技术的开发

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E.coli BL21/pET28a-cr能催化6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯合成阿托伐他汀关键手性中间体6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯。E.coli BL21/pET28a-cr培养过程产生大量含卡那霉素的发酵废水。开发发酵废水中卡那霉素脱除工艺并实现发酵废水再利用尤为重要。本文建立废水中卡那霉素含量检测方法,筛选出树脂HZD-2,去除废水中卡那霉素,研究树脂HZD-2吸附卡那霉素的热力学和动力学,最后将处理后的废水应用到井冈霉素发酵。首先建立了精确度高\操作简单的柱前衍生化高效液相色谱法定量卡那霉素。优化卡那霉素与异氰酸苯酯衍生化反应条件,确定衍生化最佳温度为70°C,最佳时间为10 min。检测方法的最低检测限为1 mg/L,检测范围为1250 mg/L,相关系数R2=0.999。高效液相色谱串联质谱验证卡那霉素检测方法的正确性,检测到检测物的分子量为961,为卡那霉素衍生物。E.coli BL21/pET28a-cr发酵培养基中,卡那霉素添加终浓度为50 mg/L,方法的检测限及检测范围满足发酵废液中卡那霉素的检测,检测出工厂E.coli BL21/pET28a-cr发酵废水中卡那霉素残余量为41.9 mg/L。其次开发卡那霉素处理工艺,从11种树脂中筛选出弱酸性阳离子交换树脂HZD-2。优化树脂HZD-2吸附卡那霉素的条件:树脂最佳用量为30 g/L,最佳吸附温度为常温30°C。筛选出2%(v/v)NH4OH对吸附卡那霉素树脂HZD-2具有良好解吸效果,解吸率为83.9%。研究树脂HZD-2静态吸附卡那霉素,确定树脂HZD-2达到吸附平衡时间为1 h,通过静态吸附动力学研究分析,表明卡那霉素在树脂HZD-2上的吸附动力学特性符合Pseudo-second-order方程。拟合后所得方程为t/qt=0.668 t+2.067,相关系数R2=0.999。树脂HZD-2应用到E.coli BL21/pET28a-cr发酵废水中卡那霉素的吸附去除,卡那霉素去除率94.1%。最后,处理后的发酵废水与自来水按1:3(v/v)混合用于配制井冈霉素发酵培养基,25%发酵废水组井冈霉素效价是纯自来水对照组井冈霉素效价的92.1%,课题实现了E.coli BL21/pET28a-cr发酵废水的资源化利用。
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