小鼠Adiponutrin转录表达调控与功能研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:benmanw
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白色脂肪组织在机体内扮演重要的角色,其异常可以导致2型糖尿病、动脉粥样硬化、高血压、血脂障碍等代谢性综合症。白色脂肪组织不仅作为脂肪贮存的场所,也参与调节全身性能量代谢与平衡。在分化的脂肪组织中可产生大量的蛋白因子以内分泌和旁分泌的方式参与机体的物质吸收、合成及贮存等代谢调控活动,并将这类因子统称为脂肪细胞因子(Adipocytokines)。  Adiponutrin即脂肪滋养蛋白,是通过mRNA差异显示技术发现的一种脂肪组织特异表达的蛋白,定位于细胞膜。研究表明,Adiponutrin基因的表达受到营养、激素与转录因子等多方面的调控。根据已有的实验证据推断Adiponutrin可能与脂肪生成相关,且可能同其他脂肪细胞因子一起参与调节体内能量平衡。研究Adiponutrin基因的生理功能及表达调控特点将有助于揭示体内物质代谢和脂肪生成与能量平衡的关系。  本实验采用双荧光素酶报告系统、ChIP、RT-PCR、细胞转染等实验技术,通过对Adiponutrin的转录表达调控进行分析,进而研究Adiponutrin在脂肪代谢以及对线粒体数量与功能的影响。结果如下:  1.生物信息学分析Adiponutrin基因启动子存在C/EBPβ结合位点,利用基因共转染、双荧光素酶报告系统和染色质免疫共沉淀证实C/EBPβ通过结合到Adiponutrin基因启动子上促进Adiponutrin的表达。  2.甘油三酯测定分析Adiponutrin对细胞脂肪沉积的影响。结果发现Adiponutrin可以促进细胞脂肪的沉积。通过检测脂肪酸合成、氧化相关基因的表达证实,Adiponutrin通过促进脂肪合成并且抑制脂肪酸氧化与甘油三酯的水解从而实现对脂肪沉积的影响。  3.在细胞中超表达Adiponutrin,利用RT-PCR检测线粒体DNA发现Adiponutrin可下调线粒体的数量。通过分析与线粒体融合、分裂与合成相关基因的表达证明,Adiponutrin对细胞线粒体减少的影响是通过抑制线粒体分裂实现的。
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