骨组织工程中运用各种生物因子及支架研究骨代谢过程中的骨形成及骨吸收成为当下科学研究及临床关注的重点。鉴于现有临床药物在骨改建过程中促骨形成时的副作用,植物源性促骨形成药物成为当下科研焦点,然而研究药物对单一离体细胞分化成骨作用并不能为药物的临床使用提供有力的证据。本实验拟研究骨碎补主要活性物质-柚皮苷对成骨细胞系MC3T3-E1的促骨形成作用,同时选择药物与颅顶骨器官建立共培养模型,运用Micro-CT扫描技术分析药物对系列骨细胞(骨细胞、成骨细胞及破骨细胞)、骨基质等共存下的颅顶骨器官骨形成的作用。目的:1.在分析区域包含整个颅顶骨的前提下,改变Micro-CT扫描后二维图像的重建层数或者位置,比较进行重建后的骨量参数(骨表面积、骨体积)是否出现改变。2.分析柚皮苷对成骨细胞系MC3T3-E1和颅顶骨骨形成的作用。方法:1.Micro-CT扫描4日龄CD-1小鼠颅顶骨,三维重建时改变空白分析区域层数或位置来分别分析:(1)996~22层组与800~50层组,分析层数不同;(2)996~22层组与随机选择层组,分析层数不同;(3)近边界上缘组与近边界下缘组,分析层数相同的骨量参数变化。2.不同浓度柚皮苷作用于MC3T3-E1后通过CCK-8法检测细胞生长、定量分析细胞分泌蛋白ALP、RT-PCR法检测MC3T3-E1细胞RUNX2、OCN和OPN基因m RNA表达量、茜素红染色柚皮苷作用下细胞矿化结节形成。3.不同浓度柚皮苷作用于颅顶骨后通过Micro-CT扫描分析颅顶骨骨量参数(骨表面积、骨体积)的变化。结果:1.在分析区域包含整个颅顶骨的前提下:(1)增加或者减少空白分析层数会导致颅顶骨骨表面积变化,而骨体积无变化。(2)随机选择层数组与996~22层数组分析比较时颅顶骨骨表面积、骨体积均有变化。(3)重建层数相同的前提下,改变分析区域位置时颅顶骨骨表面积、骨体积无变化。2.不同浓度柚皮苷(0mg/L、1mg/L、10mg/L)均可促进MC3T3-E1的RUNX2、OCN、OPN表达上调及细胞矿化结节形成,但1mg/L浓度柚皮苷促成骨作用较10 mg/L组显著。3.不同浓度柚皮苷作用的离体培养颅顶骨骨表面积和骨体积无明显变化。结论:1.柚皮苷可促体外培养MC3T3-E1细胞成骨向分化,而对体外培养颅顶骨骨形成无明显作用。2.Micro-CT三维重建时,改变重建层数可影响骨量参数,而保证分析层数相同仅改变空白分析区域的位置不会影响骨量参数。