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目的本研究拟以正常上皮细胞HaCaT作为对照细胞,以人宫颈癌细胞株SiHa,Caski,He La和C33A为研究对象,探讨miR-5195-3p对人宫颈癌细胞株增殖、迁移与侵袭的作用及其机制。方法1.人宫颈癌细胞株SiHa,Caski,He La和C33A中miR-5195-3p的表达水平:以HaCaT细胞作为对照组,宫颈癌细胞SiHa,Caski,He La,C33A为实验组,采用RT-qPCR检测miR-5195-3p在两组中的表达水平。2.人宫颈癌细胞株中miR-5195-3p的过表达和敲低对宫颈癌细胞增殖,迁移和侵袭的作用:通过阳离子脂质体介导法过表达和敲低miR-5195-3p,构建重组宫颈癌细胞Caski/5195-mimic和SiHa/5195-inhibi tor。RT-qPCR法检测宫颈癌细胞株Caski中miR-5195-3p过表达情况,SiHa中miR-5195-3p敲低情况。应用MTT、克隆形成实验,划痕愈合实验、Transwell小室法检测重组宫颈癌细胞Caski/5195-mimic和SiHa/5195-inhibitor的增殖、迁移与侵袭能力的变化。3.miR-5195-3p靶基因的预测及验证:利用Target Scan Human7.2 （http://www.targetscan.org/vert72/）,Star Basev3.0（http://starbase.sysu.ed u.cn/ago Clip RNA.php）和miRTar Base（http://mirtarbase.mbc.nctu.edu.tw/php/index.php）预测miR-5195-3p的靶基因,Draw Venn Diagram（http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）筛选出靶基因,利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-5195-3p与靶基因的结合关系。RT-qPCR和Western Blot法进一步证实miR-5195-3p靶向调控靶基因。4.重组细胞Caski/5195-mimic和SiHa/5195-inhibitor中上皮-间质转化（EMT）相关分子以及基质金属蛋白酶（MMP）的表达变化:采用RT-qPCR、Western blot法检测重组细胞Caski/5195-mimic和SiHa/5195-inhibitor中MMP7、MMP9和上皮标志物E-cadherin,间质标志物Vimentin和EMT转录因子snail的m RNA和蛋白质表达水平的变化。5.miR-5195-3p在体内对宫颈癌增殖和迁移的影响:体内实验分Caski/stable-NC（阴性对照组）、Caski/5195-3p agmoir（过表达miR-5195-3p组）两组,每组5×106个细胞,分别将两组细胞接种至雌性裸鼠皮下,随后每隔四天测量一次瘤体大小。31天后处死裸鼠,剥离瘤体组织后进行石蜡包埋,切片,HE染色;IHC检测各组瘤体ICAT、Ki-67、MMP7、MMP9、E-cadherin和Vimentin的表达。结果1.RT-qPCR结果显示,与正常上皮细胞HaCaT相比,miR-5195-3p在宫颈癌细胞Caski,SiHa,He La,C33A中表达水平偏低（P<0.05）。2.RT-qPCR结果显示,miR-5195-3p mimics转染Caski细胞24h后,miR-5195-3p表达水平显著升高（P<0.01）;miR-5195-3p inhibit ors转染SiHa细胞24h后,miR-5195-3p表达水平明显降低（P<0.05）。MTT实验、克隆形成实验结果显示,相较于阴性对照组,重组细胞C aski/5195-mimic的增殖和克隆形成能力明显下降（P<0.01）;划痕愈合与Transwell实验结果显示,Caski/5195-mimic细胞的迁移与侵袭能力均显著下降（P<0.01）;而与阴性对照组相比,重组细胞SiHa/5195-inhibitor的增殖,迁移与侵袭能力均明显增强（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。3.Target Scan Human7.2（http://www.targetscan.org/vert72/）,Star B asev3.0（http://starbase.sysu.edu.cn/ago Clip RNA.php）,miRTar Base（http://mirtarbase.mbc.nctu.edu.tw/php/index.php）等数据库预测出miR-5195-3p与ICAT的3’UTR区有结合位点,双荧光素酶报告基因实验结果表明miR-5195-3p与ICAT的3’UTR区有直接结合。RT-qPCR和Wester n blot结果显示,过表达miR-5195-3p后,Caski细胞中ICAT的m RN A和蛋白水平显著下调（P<0.05）,而敲低miR-5195-3p后,SiHa细胞中ICAT的m RNA和蛋白质表达水平显著上调（P<0.05）。4.Western blot结果显示,相较于阴性对照组,重组细胞Caski/5195-mimic的MMP7、MMP9,间质标志物Vimentin和EMT转录因子s nail的蛋白质表达水平均显著下调,上皮标志物E-cadherin蛋白质表达水平上调;重组细胞SiHa/5195-inhibitor的MMP7、MMP9,间质标志物Vimentin和EMT转录因子snail的蛋白质表达水平均明显上调,上皮标志物E-cadherin蛋白质表达水平下调。5.在宫颈癌细胞SiHa中敲低内源性ICAT的表达,在Caski细胞中外源性过表达ICAT后,相较于阴性对照组,重组细胞SiHa/si ICAT的增殖,迁移与侵袭能力均明显下降（P<0.001,P<0.001,P<0.01）,重组细胞Caski/Ad ICAT的增殖,迁移与侵袭能力均显著上调（P<0.001,P<0.01,P<0.01）。6.敲低内源性ICAT的表达后,重组细胞SiHa/5195-inhibitor的增殖、迁移和侵袭能力均下降（P<0.001,P<0.001,P<0.001）;外源性过表达miR-5195-3p后,重组细胞Caski/Ad ICAT的增殖、迁移和侵袭能力均下降（P<0.001,P<0.01,P<0.001）。7.体内实验结果表明:相较于阴性对照组,Caski/5195-3p agmoir组的瘤体体积和重量均下降（P<0.001,P<0.05）;免疫组化试验结果表明,Caski/5195-3p agmoir组的E-cadherin表达上调,而Vimentin、Ki-67、ICAT、MMP7和MMP9的表达均下调。结论1.相较于正常上皮细胞HaCaT,miR-5195-3p在宫颈癌细胞SiHa和Caski中表达较低。2.miR-5195-3p可以抑制宫颈癌细胞SiHa和Caski的增殖、迁移与侵袭能力,以及EMT进程。3.在宫颈癌细胞SiHa和Caski中ICAT是miR-5195-3p的下游靶基因之一。4.miR-5195-3p通过下调ICAT的表达来抑制宫颈癌细胞SiHa和Caski的增殖,迁移与侵袭能力,且其机制与EMT通路相关。