重组鹌鹑血管内皮生长因子表达及其抗体对小鼠Lewis肺癌的抗肿瘤作用

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抗肿瘤血管形成已成为肿瘤生物治疗的一种策略,其中以血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作为靶分子的抗肿瘤研发取得了很大进展。本实验用RT-PCR从鹌鹑胚胎中扩增出鹌鹑VEGF (qVEGF) cDNA,将其亚克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-2,用重组质粒pGEX4T2-qVEGF转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导重组菌,通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化和SDS-PAGE鉴定表达产物。纯化产物经透析复性后,用Western blot鉴定其抗原性。将C57BL/16J小鼠随机分为qVEGF-GST免疫组、qVEGF免疫组和生理赫水对照组(NS),将重组抗原与等体积弗氏佐剂混合,分别于0、2、3周经皮下多点注射,随后接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤的生长情况和小鼠状态。在接种18天后处死小鼠,剥离肿瘤称重,检测小鼠血清中抗VEGF抗体的滴度。实验结果表明:成功克隆了预期的555bp qVEGF序列,构建的原核表达载体pGEX4T2-qVEGF能在大肠杆菌中高效表达qVEGF-GST融合蛋白,纯化产物的纯度大于81%,经透析复性后可溶性蛋白的收率为59%,Western blot鉴定证明具有抗原性;qVEGF-GST免疫组,qVEGF免疫组和生理盐水对照组的肿瘤均重分别为2.29±0.429g、2.95±0.510g和3.37+0.021g,其中qVEGF-GST免疫组的肿瘤重量明显小于生理盐水对照组(P<0.01),血清抗VEGF抗体滴度为1:2000。结论:qVEGF-GST可刺激小鼠产生较高水平的抗VEGF抗体,并具有抑制小鼠Lewis肿瘤生长效应。
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