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目的:应用siRNA-Kiss-1 (Kiss-1的小干扰RNA)下调Kiss-1的表达后,检测肿瘤转移抑制基因Kiss-1在胃癌细胞系MGC-803中的表达情况,验证转染成功后,观察胃癌细胞株MGC-803的细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化,分析Kiss-1对胃癌细胞株生物学功能的影响。 方法: 1 利用CO2细胞培养箱培养低分化胃癌细胞株MGC-803,以进行本研究的细胞学功能学实验。 2使用脂质体Lipofectamine 2000介导细胞转染,致胃癌细胞株MGC-803中目的基因Kiss-1的沉默。 3实时荧光定量PCR方法检测转染实验组(siRNA-Kiss-1)、阴性对照组(siRNA-nc)及空白对照组(con)培养48h后MGC-803中Kiss-1 mRNA的表达情况。 4使用CCK-8细胞增殖实验检测转染实验组(siRNA-Kiss-1)、空白对照组(con)及阴性对照组(siRNA-nc)中MGC-803的细胞增殖情况。 5通过Transwell小室来检测转染实验组(siRNA-Kiss-1)、阴性对照组(siRNA-nc)及空白对照组(con)中 MGC-803 的细胞迁移、侵袭情况。 6 应用划痕实验检测转染实验组(siRNA-Kiss-1 )、阴性对照组(siRNA-nc)及空白对照组(con)中MGC-803的细胞迁移能力。 结果: 1 实时荧光定量PCR检测结果:Kiss-1在实验组(siRNA-Kiss-1)中低表达,与空白对照组(con)和阴性对照组(siRNA-nc)比较差异有统计学意义(P<0.05 ) 2 CCK-8增殖实验:实验组(siRNA-Kiss-1))中的MGC-803吸光度在 48h 、96h 显著低于空白对照组(con)与阴性对照组 (siRNA-nc) (P<0.05) 3 Transwell实验:实验组(siRNA-Kiss-1)中MGC-803的细胞迁移、侵袭细胞数量比空白对照组(con)和阴性对照组(siRNA-nc)均显著增加(P<0.05) 4 划痕实验表明:实验组(siRNA-Kiss-1) 中MGC-803的细胞划痕愈合能力相对于空白对照组(con)和阴性对照组(siRNA-nc)均显著增强(P<0.05) 结论: 1 CCK-8增殖实验表明,沉默Kiss-1的表达后对 MGC-803有抑制作用,提示Kiss-1不能抑制胃癌细胞的增殖能力。 2 Transwell 实验表明,沉默Kiss-1的表达后,MGC-803细胞迁移和侵袭能力均增强,提示Kiss-1抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力。 3 划痕实验表明,沉默Kiss-1的表达后,MGC-803的迁移能力变强,提示Kiss-1抑制胃癌细胞的迁移能力。 4 本组细胞功能实验结果提示,Kiss-1有潜力成为抑制胃癌侵袭与转移的治疗新靶点。