球孢白僵菌（Beauveria bassiana）是一种常见的昆虫病原真菌,广泛用于农林害虫生物防治。作为一种真菌杀虫剂,由于杀虫速度慢,且易受到光、湿、热、以及紫外线等环境影响,因此在一定程度上,限制其在植物虫害防治中的大规模使用。丝状真菌转录因子STE12作为MAPK途径中主要的调节因子,与病原真菌的生长发育和致病性有密切的关系,但目前尚未有人对球孢白僵菌的转录因子STEA功能进行研究。本研究拟通过同源重组技术将ste A基因敲除,进而分析突变株在生长发育、抗逆和致病过程等方面的表型变化。研究结果可以深入了解转录因子STEA的生物学功能,同时为研制高毒力和抗逆的球孢白僵菌基因工程菌株提供重要研究基础。具体结果如下:生物信息学分析和定位实验发现:在NCBI搜索到球孢白僵菌的转录因子STEA,基因序列号为:BBA＿01078,全长为2110 bp,编码685个氨基酸,功能域分析显示含有一个STE12结构域和两个C₂H₂锌指结构域。亚细胞定位分析显示该蛋白定位于细胞核中。通过同源重组和随机插入技术我们分别构建了敲除株（△Bbste A）和回补株（Comp）。生物学性状分析显示:与野生型相比,敲除株菌落的生长速度变慢,且产孢量减少。因此转录因子STEA对球孢白僵菌的生长发育有一定的影响。在紫外与热激的情况下,与野生型相比,虽然突变体孢子萌发均提前,但24 h后的萌发率没有显著差异,表明该基因不参与紫外与热胁迫的应答。化学胁迫实验分析:相比野生型而言,结果表明敲除株对刚果红、过氧化氢和甲萘醌耐受性均增强,但是敲除株几乎丧失了对氯化钠的耐受性。因此转录因子STEA参与调控球孢白僵菌的细胞壁完整性、氧化应激和盐胁迫过程。毒力生物测定结果表明:野生型、突变株和回补株的半致死时间(LT₅₀)分别为6.09、0、6.12（d）。发现侵染时敲除株的毒力完全丧失,并观察虫体表无黑化现象产生。孢子血腔注射显示:野生型、敲除株、回补株LT₅₀分别为3.72、3.66、3.69（d）,三者无明显差异。观察死亡虫体,敲除株菌丝无法穿透体表生长。由此,可以推断ste A基因在体壁侵染时期起重要作用。进一步蝉翅渗透实验显示敲除株完全丧失了穿透蝉翅能力,同时用RT-PCR技术对体壁降解相关基因检测发现,所测定的10个基因中,有8个不表达或显著下降。因此,转录因子STEA在体壁穿透过程中发挥必不可少的作用。综上所述,球孢白僵菌的STEA是一种转录因子,定位于细胞核中。敲除转录因子STEA导致菌株产孢量下降,丧失抗盐胁迫能力,但维持细胞壁完整性和氧化应激能力均增强。更重要的是,由于菌丝无法穿透虫体体壁生长,体壁降解基因表达量显著下降,导致侵染过程毒力完全丧失。