牛病毒性腹泻（Bovine viral diarrhea，BVD）是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引起的，主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反刍动物及猪的一种重要传染病。牛病毒性腹泻病毒属于黄病毒科 (Flaviviridae) 瘟病毒属（Pestivirus）。牛病毒性腹泻病毒感染动物机体后，可以使动物的生殖、呼吸、循环、免疫、淋巴细胞、肌肉与骨骼系统、皮肤、中枢神经等诸多系统产生相应的病理变化；同时导致动物繁殖率下降，给畜牧业造成严重的经济损失。对于本病国内外尚无可靠有效的商品化疫苗，所以尽快搞清楚本病的致病机理，对于研制出更加安全可靠有效的疫苗、控制本病发生和蔓延就显得尤为重要。本试验拟通过研究不同生物型BVDV感染体外培养的牛外周血单核细胞后干扰素、Th1/Th2 型细胞因子、Toll 样受体 mRNA的转录情况，以达到了解病毒感染后动物机体细胞后免疫功能状态，为进一步探讨 BVDV 感染动物的发病机理和持续感染的分子调节机制提供参考。　　 本试验建立了检测牛IFN、Th1/Th2细胞因子和 TLR基因的SYBR-Green 1 实时荧光定量 PCR 方法。根据 GenBank 上牛 IFN (BoIFN-α、-β、-γ)、Th1/Th2 (BoIL-2,4,6,8、TNF-α)和 TLR (BoTLR-3,4,7,8)基因的序列，在保守区设计并合成各自特异引物，并以牛3-磷酸甘油脱氢酶 (GAPDH)基因为内参，采用 SYBR Green I 染料以建立实时荧光定量 PCR 检测方法。将 IFN、Th1/Th2细胞因子和 TLR基因克隆测序，将所得阳性重组质粒，作为标准品模板建立 SYBR-Green 1 荧光定量 PCR 标准曲线并做溶解曲线分析，并做灵敏性、特异性和重复性试验。结果表明，牛IFN、Th1/Th2细胞因子、TLR和 GAPDH基因的Ct 值与标准品稀释度在 1×101～1×109 copies/μL 范围分别呈良好的线性关系，相关系数均大于 0.991。熔解曲线分析表明，产物为特异的单峰，特异性和重复性较好，为在 mRNA 水平对牛 IFN、Th1/Th2细胞因子和 TLR基因的定量分析奠定了基础。　　 应用上述建立的细胞因子检测方法，我们测定了非致细胞病变型（noncytopathic，NCP）型和致细胞病变型（cytopathic，CP）型 BVDV 感染外周血单核细胞后IFN、Th1/Th2细胞因子、促炎性细胞因子和TLR mRNA的转录水平，结果表明：在NCP型BVDV 感染前期IFN-γ、TNF-α、IL-2、TLR-4和TLR-8 呈现出上调表达的趋势，在CP型BVDV 感染前期TNFα、IL-4、IL-6、TLR-4和TLR-8 呈现出上调表达的趋势；在NCP型 BVDV感染后期IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、TLR-3、TLR-4、TLR-7和TLR-8 呈现出上调表达趋势，在CP 型 BVDV感染后期IFN-α、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-8、TLR-4和TLR-8 呈现出明显的上调表达趋势；总而言之，NCP型和CP型 BVDV 感染外周血单核细胞后对 IFN、Th1/Th2细胞因子、促炎性细胞因子和TLR mRNA的转录总体上具有相似性。提示 BVDV 可能通过TLR-4/8的表达及其信号通路来逃避免疫反应。但也在研究中发现BVDV不同的生物型可以导致细胞因子mRNA的转录出现明显的差异，我们也不排除由于基因型的不同而导致表达出现差异的可能。