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第一部分中国人UP1b基因启动子的克隆目的:利用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆人类UP1b基因启动子。方法:文献检索获得UP1b基因启动子全长序列及其核心启动序列,使用计算机引物设计程序Primer premier 5.0软件设计引物,采用分子克隆方法,从一例膀胱肿瘤病人血液标本中提取总DNA,利用聚合酶链式反应(PCR)的方法扩增得到启动子基因片断。结果:核酸序列分析证实成功克隆出中国人Uroplakin Ib基因启动子核心启动序列DNA片断,经检索发现与美国国立卫生图书馆基因库所公布的UP1b启动子全长序列(Accession number AF324865)有2个碱基不同,同源性高达99%,与Olsburgh的研究结果完全一致,同源性高达100%。结论:中国人UPlb基因启动子克隆成功,为靶向性基因治疗膀胱癌提供了试验基础。第二部分含人类UPlb基因启动子的Smac基因真核表达质粒的构建目的:利用己成功克隆的人类UP1b基因启动子,构建含人类UP1b基因启动子的Smac基因真核表达质粒。方法:检测已获得的含Smac基因真核表达载体质粒pcDNA3.1(-),采用分子克隆方法,分别用核酸内切酶Xba1和Nhe1双酶切人类UPlb基因启动子片断和质粒载体,纯化回收有效片断进行T4DNA连接反应,将UP1b基因启动子正向插入到真核表达载体pcDNA3.1(-)-Smac的限制性内切酶位点XbaI、Nhe1之间,完成基因重组。重组质粒转化大肠杆菌JMl09,进行扩增并鉴定。结果:重组质粒PCR法初步筛选,进行质粒DNA酶切电泳分析,证实UPlb基因启动子重组入Smac基因的真核表达质粒pcDNA3.1(-)-Smac中。结论:含人类UPlb基因启动子的Smac基因真核表达质粒pcDNA3.1(-)-UPlbpromoter-Smac构建成功,为靶向性基因治疗膀胱癌提供了试验依据。第三部分中国人UP1b基因启动子活性检测目的:利用已成功克隆的人类UP1b基因启动子,构建含人类UP1b基因启动子的报告基因载体质粒pGL 3-Enhancer-UPlb promoter。在人膀胱肿瘤细胞系BIU-87中分析UP1b启动子活性。方法:采用分子克隆方法,分别用核酸内切酶Nhe1酶切人类UPlb基因启动子片断和萤火虫荧光素酶报告基因载体质粒pGL 3-Enhancer,纯化回收有效片断进行T4DNA连接反应,将UP1b基因启动子插入到真核表达载体pGL 3-Enhancer的限制性内切酶位点Nhe1之中,完成基因重组。重组质粒转化大肠杆菌JMl09,进行扩增并鉴定后,利用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将质粒pGL 3-Enhancer-UP1b promoter瞬时转染入人膀胱肿瘤细胞系BIU-87中进行细胞培养,倒置荧光显微镜观察检测荧光表达情况。结果:重组质粒PCR法初步筛选,进行质粒酶切分析,证实UP1b基因启动子重组入载体质粒pGL3-Enhancer中,倒置荧光显微镜观察可见启动子的报告基因载体质粒pGL 3-Enhancer-UP1b promoter转染组细胞荧光表达良好。结论:含人类UP1b基因启动子的报告基因载体质粒pGL 3-Enhancer-UP1bpromoter质粒构建成功,人类UPlb基因启动子具有良好的启动活性。第四部分膀胱移行细胞癌复发风险多因素分析目的:探讨与膀胱移行细胞癌复发时间相关的显著性因素,建立预测复发的数学模型。方法:应用Cox比例风险模型和Logistic线性回归方法对212例行手术治疗的膀胱移行细胞癌的临床表现、治疗、病理特点等方面16项指标与复发时间进行统计分析。结果:区域淋巴结转移是与复发时间相关的最显著因素,相对危险(Hr)为6.6,其次为多发性肿瘤(Hr=2.255)、三角区及膀胱颈肿瘤(Hr=2.053)、病理分期(Hr=2.057)、病理分级(Hr=1.569);膀胱灌注治疗(Hr=0.559)和血尿程度(Hr=0.762)为保护性因素。据此建立影响膀胱癌术后复发的预测方程:PI=0.81305X4+0.71935X6(1)+0.36979X7+0.4507X8+0.72117X9+1.88711X10+(-0.58079)X14+(-0.2713)X15。利用此防方程代入原始数据,并将预测结果与实际结果比较,其灵敏度、特异度、及符合率分别83.5为%、67.6%、80.1%,两者基本相符。结论:根据上述模型可对移行细胞癌患者的预后做出较为准确的评价。