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目的:原发性胆汁性胆管炎（Primary biliary cholangitis,PBC）是一类以非化脓性中、小胆管损伤为主要病理特点的自身免疫性肝病。既有研究发现,过度活化的T细胞在PBC的发生、发展中有重要作用,但具体机制尚未阐明。近年来,免疫检查点作为调节淋巴细胞活性的分子开关而引起广泛关注。其中,CD226/TIGIT这一新型T细胞免疫检查点更被认为可能与自身免疫病的发生、发展密切相关,有望成为其潜在的治疗靶点。本研究首次对CD226/TIGIT在PBC发病机制中的作用进行探索。方法:本研究入组就诊于北京协和医院PBC患者42例,以及包括有疾病对照（Diseasecontrol,DC）和健康对照（Healthcontrol,HC）的对照组 55 例。采用流式细胞检测、分选技术,免疫组化技术,体外细胞培养,荧光实时定量PCR技术和统计分析等方法完成CD226/TIGIT免疫检查点相关外周血T淋巴细胞表型检测、细胞功能测定、受累组织免疫分析、可溶性免疫检查点分子检测、体外免疫检查点干预和临床相关性分析等。通过上述多个视角,探究该检查点对PBC发生、发展的影响及可能的分子机制。结果:PBC组外周血CD8+T细胞和CD4+T细胞均存在明显的CD226和TIGIT表达异常。PBC组与HC组相比,CD8+CD226+T细胞占比（%）、CD8+TIGIT+T细胞%、CD4+CD226+T细胞%和 CD4+TIGIT+T 细胞%均显著升高（71.8±12.0vs.52.0± 14.1,p<0.001;60.0± 15.60 vs.41.7± 12.9,p<0.001;63.0± 13.3 vs.50.1±11.7,p<0.001;31.5±8.7 vs.26.2±7.1,p=0.032）。PBC 组与 DC 组相比亦有相似趋势。DC组和HC组在上述各细胞亚群占比的比较中未见统计学差异。在相关性分析中,CD8+T细胞相关CD226/TIGIT亚群占比与PBC临床生化指标的关系尤为密切:CD8+TIGIT+T细胞%与患者碱性磷酸酶（r=-0.39,p=0.01）,γ-谷氨酰转肽酶（r=-0.35,p=0.02）,总胆红素（r=-0.38,p=0.01）,直接胆红素（r=-0.43,p<0.01）和总胆汁酸（r=-0.35,p=0.03）呈负相关,与血小板计数（r=0.38,p=0.03）呈正相关。CD8+CD226+T细胞%则与碱性磷酸酶（r=0.37,p=0.02）呈正相关。采用CD226/TIGIT比值进行相关性分析时,PBC患者CD8+T细胞的CD226/TIGIT比值与碱性磷酸酶（r=0.42,p<0.01）,γ-谷氨酰转肽酶（r=0.31,p=0.04）,总胆红素（r=0.31,p=0.04）,直接胆红素（r=0.35,p=0.02）和总胆汁酸（r=0.47,p<0.01）呈正相关,与血小板计数（r=-0.34,p=0.04）呈负相关。此外,该比值还和PBC患者预后指标天冬氨酸转氨酶与血小板计数的比值之间存在正相关（r=0.35,p=0.04）,和血清白蛋白水平之间存在负相关（r=-0.40,p=0.02）。在组间差异分析模型中,CD226/TIGIT表型数据分辨PBC组和DC组以及PBC组和HC组时有较好的准确度,分别为80%-89%和86%-92%。其中CD8+T细胞相关表型数据处于区分PBC组重要特征的第一位。进一步的细胞活化和功能分析证实CD226+T细胞群较CD226-T细胞群拥有更强的效应功能:CD226+T细胞群的CD107a+细胞%（77.5±7.8 vs.67.8±9.8,p<0.001）,IFN-γ+细胞%（71.3±13.9 vs.55.6 ± 15.7,p=0.04）和 TNF-α+细胞%（68.0±10.7 vs.56.9±14.4,p<0.001）较 CD226-T 细胞明显增多;而TIGIT+T细胞则可能为机体免疫系统异常活化后反馈调节的产物:PBC患者HLA-DR+细胞中TIGIT+细胞%较HLA-DR-细胞显著增加（63.2±17.4 vs.42.6±14.0,p<0.01）;且流式细胞分选和体外培养显示TIGIT-T细胞体外刺激72小时后有TIGIT+T细胞生成。病理相关研究发现受累组织中亦存在CD226/TIGIT失衡:在PBC患者肝脏中未染出TIGIT阳性细胞,但可见大量CD226阳性淋巴细胞,同时肝组织出现了 CD155 阳性染色。此外,可溶性CD226和CD155在各组中阳性率较低且无统计学差异。在体外干预方面,封闭CD226可以显著减少CD8+CD226+T细胞中 CD107a+细胞%（81.1±5.1 vs.72.7±7.8,p=0.032）、IFN-γ+细胞%（69.2±6.7 vs.52.9±15.6,p=0.024）和 TNF-α+细胞%（76.4±5.9 vs.58.6±14.7,p=0.021）并抑制细胞增殖。加入CD226/TIGIT的配体,即CD155重组蛋白则对CD8+TIGIT+T细胞的功能无显著影响。结论:PBC中存在有CD226/TIGIT免疫检查点失衡,是潜在的发病机制之一。未来应在更全面的队列以及动物模型中开展更深入的研究,阐明CD226/TIGIT免疫检查点参与PBC发生发展的模式并进一步评价其潜在临床应用价值。