环氧化酶-2在上皮性卵巢癌的表达及其启动子调控BAX对卵巢癌细胞系的选择性作用

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目的:通过检测COX-2蛋白在上皮性卵巢肿瘤组织和卵巢癌细胞系中的表达,探讨COX-2蛋白在上皮性卵巢肿瘤发生、进展中的作用以及COX-2表达水平与肿瘤临床病理参数间的关系。利用基因重组技术构建COX-2启动子调控促凋亡基因BAX的重组质粒,体外转染实验检测COX-2启动子在卵巢癌基因治疗中的应用价值。 方法:(1)采用SP免疫组化染色法,对118例原发性上皮性卵巢肿瘤石蜡切片及5种卵巢癌细胞系的COX-2蛋白表达进行检测,分析卵巢浆液性囊腺癌中的COX-2蛋白表达与临床病理参数之间的关系。(2)用基因重组技术构建重组质粒COX-2-BAX和CMV-Luc,并酶切签定。(3)脂质体法分别把质粒COX-2-Luc、CMV-Luc瞬时转染COX-2阳性表达的卵巢癌细胞系SKOV-3和COX-2阴性表达的结肠癌细胞系SW480,用光照度计检测荧光素酶报告基因的表达水平。(4)脂质体法分别把质粒COX-2-BAX、CMV-BAX瞬时转染卵巢癌细胞系SKOV-3和结肠癌细胞系SW480,流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果:(1)COX-2蛋白在卵巢恶性、交界性和良性上皮性肿瘤石蜡切片中的表达率分别为44%(37/84)、32%(6/19)和0%(0/15),结果有显著性差异(P=0.006)。(2)COX-2蛋白在所检测的5种卵巢癌细胞系中有4种呈阳性表达。(3)在68例卵巢浆液性囊腺癌组织中,不同临床分期、不同病理分级的COX-2表达无显著性差异(分别P=0.716及P=0.700)。(4)成功构建重组质粒COX-2-BAX和CMV-Luc,经测序及酶切鉴定均含目的序列。(5)COX-2-Luc转染SKOV3和SW480细胞24h后,荧光素酶.-~~~~-二日臼公日涟匕华理毕尝全‘--- 报告基因活性分别为1554士86.5和53.7士10.9.C柳一Luc转染SKOV3和 SW48O细胞24h后,荧光素酶报告基因活性分别为9851.7士129.5和 8831.0士167.3。在同一种细胞,C柳启动子的转录效率分别是Cox一2启 动子的6.3倍(SKOV3)和164.5倍(SW480)。(6)COX一2一BAX转染SKOV一3 和SW480细胞36h后,细胞凋亡率分别为10.4%,3.7%;C柳一BAx转 染SKOV一3和SW480细胞36后,细胞凋亡率分别为21.7%,25.6%. 结论:(1) COx--2蛋白在上皮性卵巢癌中表达明显上调。(2)在卵巢 浆液性囊腺癌,COX一2蛋白的表达水平与肿瘤临床病理参数无明显相关。 (3)COX一2启动子有一定的肿瘤特异性,但其转录效率明显低于C袱启 动子。用COX一2启动子构建的重组载体需经合理修饰后才可用于卵巢癌 的基因治疗。
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