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肝癌是严重威胁人类生命健康的恶性疾病之一,近几年来肝癌发病率逐年增高。microRNA（miRNA）通过调控多种癌基因和抑癌基因表达影响肝癌的发生与发展。外泌体携带的miRNA更是多角度参与调控肝癌细胞的增殖、分化和凋亡等过程,在肝癌进程中发挥重要作用。本研究通过检测正常人、乙肝、肝癌血浆外泌体中miRNA的表达情况,发现外泌体miRNA-455-3p在肝癌患者中明显降低,而有关外泌体miRNA-455-3p对肝癌的影响未见相关报道。因此,我们对外泌体miR-455-3p在肝癌中的作用机制进行了探讨。目的:探讨外泌体miR-455-3p在肝癌中的作用机制。方法:1.采用高通量测序技术分析血浆外泌体中miRNAs的表达差异。2.外泌体提取方法:超速离心法分离外泌体。3.外泌体鉴定方法:透射电镜鉴定外泌体形态;Aminis量化成像流式检测外泌体表面marker（CD9、CD63）;纳米颗粒追踪技术和纳米流式检测外泌体粒径及其分布;Western blot（WB）检测外泌体膜蛋白（CD63）。4.RT-PCR技术检测血浆外泌体和转染后肝癌细胞HepG2及其外泌体中miRNA-455-3p的表达。5.CCK8试剂检测细胞增殖能力;6.Transwell技术检测细胞侵袭能力;7.Carlibur流式细胞仪检测线粒体膜电位变化和细胞凋亡情况;8.Western blot检测Akt、p-Akt、PI3KR1、Bax蛋白表达水平。结果:1.血浆外泌体中miRNA-455-3p的表达情况miRNA-455-3p在肝癌患者血浆外泌体中相对表达量为（0.25 ±0.90）,较正常人组（0.94±0.03）表达明显下调,差异有统计学意义（P＜0.001）。2.miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2的影响2.1 miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2增殖的影响CCK8实验结果显示,miRNA-455-3p mimics组细胞OD值为（0.57±0.01）,较mimics-NC组（0.68±0.02）抑制肝癌细胞HepG2增殖,差异有统计学意义（P＜0.05）;miRNA-455-3p inhibtor 组 OD 值为（0.78±0.01）,较inhibitor-NC组（0.69±0.01）促进细胞增殖,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.2 miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2凋亡的影响流式结果显示,miR-455-3p mimics处理组细胞凋亡率为（12.4±0.26）%,较 mimics-NC 组（2.82±0.14）%细胞凋亡率升高,差异有统计学意义（P＜0.001）。miR-455-3p inhibitor组细胞凋亡率为（2.93±0.10）%,较 inhibitor-NC 组（3.08±0.09）%,对细胞凋亡影响不明显,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.3 miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2线粒体膜电位的影响流式结果显示,miR-455-3p mimics 组绿色 JC-1 占总（28.2±0.87）%,较mimics-NC组（8.31±0.46）%所占百分比显著升高,差异有统计学意义（P＜0.001）。miR-455-3p inhibitor 处理组（14.60±0.70）%,较 inhibitor-NC组（16.13±0.32）%所占百分比无显著差异,差异无统计学意义（P＞0.05）。2.4 miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2侵袭的影响Transwell结果显示,miR-455-3p mimics组细胞侵袭率为（0.79±0.02）%,较 mimics-NC 组（1.05±0.01）%侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义（P＜0.05）;miR-455-3p inhibitor组细胞侵袭率为（2.29±0.06）%,较 inhibitor-NC 组（1.04±0.04）%侵袭能力明显增强,差异有统计学意义（P＜0.00l）。2.5 miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2蛋白表达的影响Western blot 结果显示,与 mimics-NC 相比,miR-455-3p mimics 处理组p-Akt、PI3KR1表达下降,凋亡相关蛋白Bax表达升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）,Akt表达变化不明显,没有统计学意义（P＜0.05）。miR-455-3p inhibitor 处理组与对照组 inhibitor-NC 相比,PI3KR1 和 Akt表达差异不显著,没有统计学意义（P＜0.05）。3.外泌体miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2的影响3.1外泌体miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2增殖的影响CCK8 结果显示,外泌体 miR-455-3p mimics（Exosome miR-455-3p mimics,EXmiR-455-3p mimics）组细胞 OD 值为（0.77±0.02）,较外泌体 miR-455-3p mimics-NC（Exosome mimics-NC,E-MN）组（0.94±0.03）抑制细胞增殖,差异有统计学意义（P＜0.05）。外泌体miR-455-3p inhibitor（Exosome miR-455-3p inhibitor,EXmiR-455-3p inhibitor）组细胞 OD 值为（1.08±0.05）,较外泌体 miR-455-3p inhibitor-NC（Exosome inhibitor-NC,E-IN）组（0.84±0.03）促进肝癌细胞 HepG2 增殖,差异有统计学意义（P＜0.05）。3.2外泌体miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2凋亡的影响流式结果显示,EXmiR-455-3p mimics处理组细胞凋亡率为（8.6±0.36）%,较E-MN组（3.62±0.29）%凋亡比率升高,差异有统计学意义（P＜0.001）。EXmiR-455-3p inhibitor处理组细胞凋亡率为（4.16±0.13）%,较E-IN组（3.16±0.52）%细胞凋亡率变化不显著,差异无统计学意义（P＞0.05）。3.3外泌体miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2线粒体膜电位的影响流式结果显示,EXmiR-455-3p mimics处理组JC-1-FITC占总百分比为（39.8±2.31）%,较E-MN组（30.73±0.50）%所占比例升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。EXmiR-455-3p inhibitor 组 JC-1-FITC 占总百分比为（37.20±0.87）%,较E-IN组（37.37±0.50）%所占比例差异不在显著,差异无统计学意义（P＞0.05）。3.4外泌体miRNA-455-3p对肝癌细胞HepG2侵袭的影响Transwell结果显示,EXmiR-455-3p mimics组中肝癌细胞HepG2侵袭率为（0.68±0.03）%,较E-MN组（0.87±0.02）%细胞侵袭能力下降,差异有统计学意义（P＜0.001）。EXmiR-455-3p inhibitor组细胞侵袭率为（1.25±0.06）%,较E-IN组（0.81±0.05）%细胞侵袭能力增高,差异有统计学意义（P＜0.001）。结论:1.miRNA-455-3p在肝癌血浆外泌体中表达下降。2.miRNA-455-3p抑制肝癌细胞HepG2增殖、侵袭,促进细胞凋亡。3.外泌体miRNA-455-3p抑制肝癌细胞HepG2增殖、侵袭,促进细胞凋亡。4.miRNA-455-3p可能通过信号通路PI3K/Akt影响肝癌细胞HepG2。