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本研究采用气管夹闭窒息法建立与脑复苏患者具有可比性的大鼠全脑缺血缺氧性损害的脑复苏模型,并在动物模型中使用近年来研制出来的新型高效的特异性的MMP 9抑制剂SB-3CT,以阻断CPCR早期大鼠脑组织MMP9的表达和活性,并观察脑组织MMP9的的表达和活性的变化,以及其对血脑屏障有作用,对炎性细胞因子的产生的影响,可望为临床脑复苏治疗提供一种新的思路。
第一部分 气管夹闭窒息法大鼠心肺复苏模型的建立研究
目的:通过建立气管夹闭窒息法大鼠心肺复苏模型,观察该模型操作的复苏效果,探讨其在复苏后脑的缺血-再灌注损伤中的研究价值。
材料与方法:
选用SD雄性大鼠25只,诱导麻醉后,进行心电监护、经皮血氧饱和度监测、有创动脉压监测、动物呼吸机进行机械通气。于呼气末夹闭气管插管致呼吸停止,导致大鼠心跳骤停,后进行心肺复苏,并观察大鼠心电图、颈动脉平均动脉压(mean artery pressure,MAP)、动脉血气等的变化。
结论:
本实验在参考了国外相关文献的基础上,成功建立了窒息大鼠心肺复苏模型,模型基本稳定。
在制作窒息法心肺复苏时,通过血压、HR、血气等的动态监测,及时进行心肺复苏,适当应用肾上腺素和补碱治疗,可提高大鼠心肺复苏模型成功率。
气管夹闭法大鼠窒息心肺复苏模型制作设备简单,成本低,操作容易,模型制作成功率高,复苏后心率、血压很快恢复至心脏骤停前水平,适用于因缺氧引起的心搏骤停所致的脑缺血-再灌注损伤的研究。
第二部分 基质金属蛋白酶9(MMP9)功能阻断对脑复苏大鼠脑组织MMP9的表达和血脑屏障的影响研究
目的:脑复苏目前已经成为CPCR研究的主要难点和研究热点之一。本研究通过使用SB-3CT阻断CPCR早期大鼠脑组织MMP9的表达和活性,观察脑组织MMP9的表达和活性的变化,以及其对血脑屏障的作用,研究其在复苏后脑的缺血-再灌注损伤中的治疗价值。
材料与方法:
将动物分为3组,假手术对照组、复苏治疗组和复苏对照组,每组40只,共120只。在即刻及3、9、24h和48h时间点分5个时间点,每个时间点8只动物处死并取样。
在不同时间点处死大鼠后,取样,测定脑组织基质金属蛋白酶9蛋白的表达和检测脑组织基质金属蛋白酶9mRNA。并观察脑含水量、脑组织伊文思蓝含量和使用电镜观察脑组织的超微结构。
结论:
1、在心肺复苏大鼠脑缺血模型中MMP9蛋白和MMP9mPRNA的表达明显升高,24h达高峰;脑组织的脑含水量和伊文思蓝含量明显升高,血脑屏障受到破坏,24h达高峰。电镜超微结构观察证实脑组织损伤明显, 24h达高峰。
2、在心肺复苏大鼠脑缺血模型中应用特异性基质金属蛋白酶9抑制剂SB-3CT能明显减少MMP9的表达,明显减轻脑水肿,对心肺复苏后脑缺血-再灌注损伤有明显保护作用。
第三部分 基质金属蛋白酶9(MMP9)功能阻断对脑复苏大鼠脑组织炎症反应的影响研究
目的:炎症反应在心肺复苏后脑缺血-再灌注损伤中起着重要的作用。本研究通过使用SB-3CT阻断CPCR早期大鼠脑组织MMP9的表达和活性,使脑组织MMP9的表达和活性明显降低,以观察其对炎性细胞因子的产生的作用,探讨其在复苏后脑的缺血-再灌注损伤中的应用价值。材料与方法将动物分为3组,假手术对照组、复苏治疗组和复苏对照组,每组40只,共120只。在即刻及3、9、24h和48h时间点分5个时间点,每个时间点8只动物处死并取样。
在不同时间点处死大鼠后,取样,采用双抗体夹心ELISA,检测脑组织上清液TNF-α、IL-1和IL-6的含量。
结论:
1、大鼠心肺复苏后,大鼠脑组织炎性细胞因子TNF-α、IL-1和IL-6的产生明显增加。 2、特异性基质金属蛋白酶9抑制剂SB-3CT对炎性细胞因子TNF-α、IL-1和IL-6有明显的抑制作用,可望为临床脑复苏治疗提供一种新的思路。