本研究的目的：①探讨GnRHa不同浓度、不同作用时间对乳腺癌细胞增生、细胞周期、细胞迁移等生物学特性的影响。②在有雌激素和无雌激素条件下，GnRHa对乳腺癌细胞增生的影响，以及对ER α、GnRH-R、PCNA mRNA表达的影响。③GnHRa作用下，5-Fu和EPI对乳腺癌细胞抑制作用是否有影响，同时观察在GnRHa作用下乳腺癌细胞多药耐药基因(MDRl)表达变化。 第一章GnRHa对乳腺癌细胞株生长的影响 研究目的:探讨GnRHa不同浓度、不同作用时间对乳腺癌细胞增牛、细胞周期和细胞迁移的影响。 材料和方法: 乳腺癌细胞株MCF-7细胞(雌激素受体阳性)和MDA-MB-231(雌激素受体阴性)的培养条件为：PRMI-1640+10％胎牛血清(FBS)。将处于生长对数期的细胞按2000个／孔(100ul／孔)的浓度接种至96孔板，细胞贴壁后加入不同浓度的GnRHa(triptorelin)，每天换液。具体分组为：①对照组；②GnRHa(10-9mol／L)组：③GnRHa(10-8mol／L)组；④GnRHa(10-7mol／L)组；⑤GnRHa(10-6mol／L)组；⑥GnRHa(10-5mol/L)组。加入GnRHa时为O天，分别在1天、4天、7天分别应用CCK-8试剂盒进行细胞活性检测，450nm处的吸光度(A450)越高，表示细胞活性越高。将处于生长对数期的细胞按2000个／孔(100 ul／孔)的浓度接种至96孔板，分组为①对照组；②GnRHa(10-5mol／L)。分别在加药后不同时间(1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天)进行CCK-8检测细胞活性。每个分组设8个复孔，每个实验重复3次。 结论: ①不同浓度的GnRHa(10-9mol／L～10-5mol／L)对MCF-7细胞和MDA-MB-231增殖无影响； ②GnRtta(10-5mol／L)作用1天到7天对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的增殖无影响。 ③GnRHa(10-5mool／L)对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的细胞周期、细胞迁移无影响。 第二章两种雌激素条件下GnRHa对乳腺癌细胞生长及ER α、GnRH-R、PCNA mRNA表达的影响 研究目的:探讨在有雌激素和无雌激素两种条件下，GnRHa对乳腺癌细胞增生的影响，以及对ER α、GnRH-R、PCNA mRNA表达的影响。 材料和方法: 配制普通培养基(PRMI-1640+10％FBS)和无雌激素培养基(无酚红PRMI-1640+10％炭吸附胎牛血清CSFBS)。乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231先在普通培养基中培养。将处于对数期的细胞按2000个／孔(100μ l／孔)的浓度接种至96孔板，用无雌激素培养基培养24小时后，分组加入不同的培养基和药物。分组为：①普通培养基组；②普通培养基+GnRHa组；⑨无雌激素培养基组；④无雌激素培养基+GnRHa组。其qaGnRHa浓度为10-5mol／L。每天更换培养基及药物。分别在分组加药后不同时间(2天、4天、6天)，进行CCK-8检测细胞活性。每个分组设8个复孔，每个实验重复3次。因此每个实验值代表24次检测的均数。 结论: ①在无雌激素培养基条件下，GnRHa不影响乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA-MB-23 1)的增殖; ②在普通培养基和无雌激素培养基条件下，GnRHa都上调乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA—MB-231)的GnRH-R mRNA表达； ③在普通培养基和无雌激素培养基两种条件下，GnRHa都下调MCF-7细胞的ER α mHNA表达； ④在无雌激素培养基， GnRHa使乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA-MB-231)的PCNAmRNA表达增强；普通培养基中GnRHa使MDA-MB-231细胞PCNA mRNA表达增强，而MCF-7细胞的PCNA mRNA表达无改变。 第三章 GnRHa对乳腺癌细胞株化疗敏感性的影响 研究目的:探讨在GnHRa作用后，5-FU和EPI对乳腺癌细胞抑制作用是否有影响，同时观察在GnRHa作用下乳腺癌细胞多药耐药基因(MDRl)表达变化。 材料和方法: 乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)用GnRHa(10-5mol／L)(GnRHa组)处理4天，同时设立对照组。4天后，在对照组和GnRHa组细胞中分别加入不同浓度的5-FU(0.00005mg／ml～5mg／ml)或不同浓度的EPI(0.125μg／ml～2μg／ml)。24小时后，用CCK-8法检测细胞活性。分别计算5-FU和EPI对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞的半数细胞抑制浓度(IC50)。 结论: ①GnRHa不影响5-FU和EPI对乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA-MB-231)的抑制作用。 ②GnRHa可能通过下调MDRl mRNA表达水平，减弱MCF-7细胞的耐药性。