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目的:本实验基于中医“肾藏精,主骨生髓”以及“阴阳互济”理论,研究左、右归丸调控AMPK/m TOR信号通路对PMOP大鼠骨形成的影响,进一步探讨左、右归丸在防治PMOP过程中对骨形成的作用机制。材料与方法:SPF级2月龄SD雌性未生育大鼠60只,随机分为空白组（KB组）8只,假手术组（SHAM组）8只,造模组44只。从背部入路摘除双侧卵巢建立PMOP大鼠模型,SHAM组切除卵巢周围与卵巢等大体积的脂肪组织。术后,将造模组随机分为模型组（OVX组）、补佳乐组（BJL组）、左归丸组（ZGW组）、右归丸组（YGW组）,适应性喂养7d之后,灌胃给药,1次/d,给药12W。剔除造模、灌胃、营养不良等因素导致不符合纳入实验标准的大鼠12只,共纳入实验大鼠48只。末次给药后,禁食12h。采用腹主动脉取血、静置、离心、分装血清,-80℃保存;取大鼠左腿股骨,剔除肌肉、筋膜组织,剪断两端,用PBS缓冲液反复冲洗骨髓腔,至骨干发白,将含有骨髓的PBS缓冲液离心、分装,置于-80℃冰箱保存;取大鼠右腿股骨,剔除肌肉、筋膜组织,生理盐水纱布包裹,-80℃冻存;游离腰椎,取大鼠L3-L5腰椎,剔除肌肉组织,用4%的多聚甲醛固定。采用Micro-CT检测大鼠L3-L5腰椎的骨量参数以及三维结构重建,评价大鼠腰椎骨微结构;采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清BGP、BALP的含量;采用Real time PCR法检测大鼠股骨、骨髓中COL I、Runx2以及中骨髓AMPKα、m TOR的基因表达;采用western-blot法检测大鼠股骨、骨髓中Runx2、COL I、ALP、BGP蛋白表达以及骨髓中AMPKα、m TOR的蛋白磷酸化水平。结果:1左、右归丸对PMOP大鼠骨形成的影响1.1左、右归丸对PMOP大鼠腰椎骨微结构参数及形态学的影响Micro-CT检测结果显示,与KB组比较,OVX组BMD、BS/TV、BV/TV、Conn-Dens、Tb.Th显著降低（P<0.01）,BS/BV、Tb.Sp显著升高（P<0.01）,骨小梁由板状结构向杆状结构变化,骨小梁结构稀疏、细小、断裂增多,排列不均,骨微结构明显破坏,提示成功制备PMOP大鼠模型。与OVX组比较,ZGW、YGW和BJL组BMD、BS/TV、BV/TV、Conn-Dens、Tb.Th显著升高（P<0.05）,BS/BV、Tb.Sp显著降低（P<0.05）,骨小梁板状结构增多,骨小梁结构紧凑、增粗、断裂减少,排列均匀。1.2左、右归丸对PMOP大鼠血清BGP、BALP浓度的影响研究结果显示,与KB组比较,OVX组血清BGP、BALP含量明显升高（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组血清BGP、BALP含量明显降低（P<0.01）;与BJL组比较,ZGW组血清BGP、BALP含量无明显差异（P（29）0.05）,YGW组血清BALP含量升高（P<0.01）,YGW组血清BGP含量无明显差异（P（29）0.05）。1.3左、右归丸对PMOP大鼠骨、骨髓组织COL I、Runx2基因与蛋白表达的影响1.3.1左、右归丸对PMOP大鼠骨、骨髓组织COL I、Runx2基因表达的影响研究结果显示,与KB组比较,OVX组骨、骨髓COL I、Runx2基因表达显著降低（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组骨、骨髓COL I、Runx2基因表达显著升高（P<0.05）,与BJL组比较,ZGW组骨COL I基因表达显著升高,YGW组显著降低（P<0.05）,两组骨髓COL I基因表达无显著性差异（P（29）0.05）,ZGW、YGW组骨、骨髓Runx2基因表达无显著性差异（P（29）0.05）。1.3.2左、右归丸对PMOP大鼠骨、骨髓组织COL1、Runx2蛋白表达的影响研究结果显示,与KB组比较,OVX组骨、骨髓COL I、Runx2蛋白表达显著降低（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组骨、骨髓COL I、Runx2蛋白表达显著升高（P<0.01）;与BJL组比较,ZGW组骨、骨髓COL I蛋白表达显著升高（P<0.01）,YGW组骨COL I蛋白表达显著升高（P<0.01）,骨髓COL I蛋白表达无显著性差异（P（29）0.05）,ZGW组骨髓Runx2蛋白表达显著降低（P<0.01）,骨Runx2蛋白表达无显著性差异（P（29）0.05）,YGW组骨、骨髓Runx2蛋白表达显著降低（P<0.05）。1.4左、右归丸对PMOP大鼠骨、骨髓组织BGP、ALP蛋白表达的影响研究结果显示,与KB组比较,OVX组骨、骨髓BGP蛋白表达显著降低（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组骨、骨髓BGP蛋白表达显著升高（P<0.01）;与BJL组比较,ZGW组骨、骨髓BGP蛋白表达显著升高（P<0.01）,YGW组骨髓BGP蛋白表达升高（P<0.01）,骨BGP蛋白表达无显著性差异（P（29）0.05）。研究结果显示,与KB组比较,OVX组骨、骨髓ALP蛋白表达显著升高（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组骨、骨髓ALP蛋白表达显著降低（P<0.01）;与BJL组比较,ZGW、YGW组骨、骨髓ALP蛋白表达无显著性差异（P（29）0.05）。2左、右归丸对PMOP大鼠骨髓AMPK/m TOR信号通路的影响2.1左、右归丸对PMOP大鼠骨髓AMPKα基因表达与蛋白磷酸化水平的影响2.1.1左、右归丸对PMOP大鼠骨髓AMPKα基因表达的影响研究结果显示,与KB组比较,OVX组骨髓AMPKα基因表达显著升高（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组骨髓AMPKα基因表达显著降低（P<0.01）;与BJL组比较,ZGW组骨髓AMPKα基因表达明显降低（P<0.05）,YGW组骨髓AMPKα基因表达无显著性差异（P（29）0.05）。2.1.2左、右归丸对PMOP大鼠骨髓AMPKα蛋白磷酸化水平的影响研究结果显示,与KB组比较,OVX组骨髓AMPKα蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组骨髓AMPKα蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.01）;与BJL组比较,ZGW、YGW组骨髓AMPKα蛋白磷酸化水平无显著性差异（P（29）0.05）。2.2左、右归丸对PMOP大鼠骨髓m TOR基因表达与蛋白磷酸化水平的影响2.2.1左、右归丸对PMOP大鼠骨髓m TOR基因表达的影响研究结果显示,与KB组比较,OVX组骨髓m TOR基因表达显著降低（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组骨髓m TOR基因表达显著升高（P<0.01）;与BJL组比较,ZGW组骨髓m TOR基因表达显著升高（P<0.01）,YGW组骨髓m TOR基因显著降低（P<0.01）。2.2.2左、右归丸对PMOP大鼠骨髓m TOR蛋白磷酸化水平的影响研究结果显示,与KB组比较,OVX组骨髓m TOR蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.01）;与OVX组比较,ZGW、YGW、BJL组骨髓m TOR蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）;与BJL组比较,ZGW、YGW组骨髓m TOR蛋白磷酸化水平无显著性差异（P（29）0.05）。结论:1.PMOP大鼠骨质量下降,呈现骨微结构破坏以及骨代谢紊乱状态;左、右归丸可以提高PMOP大鼠骨质量,改善骨微结构破坏,纠正骨代谢紊乱,防治PMOP。2.PMOP的发生与相关成骨基因和蛋白表达下调,骨形成不足有关;左、右归丸可以促进相关成骨基因和蛋白的表达,促进骨形成,防治PMOP,通过比较,左归丸促进PMOP大鼠骨形成效果优于右归丸。3.PMOP大鼠AMPK信号通路异常激活,m TOR信号通路异常抑制;左、右归丸可以抑制PMOP大鼠AMPK信号通路的异常激活,解除m TOR信号通路的异常抑制,调控AMPK/m TOR信号通路。通过比较,左、右归丸对AMPK/m TOR信号通路的磷酸化水平调节无显著性差异,但左归丸调控AMPK/m TOR信号通路的基因表达效果优于右归丸。4.左、右归丸可以调控AMPK/m TOR信号通路促进PMOP大鼠相关成骨指标表达,促进骨形成,有效防治PMOP。