目的:散发性结直肠癌的发病率占总结直肠癌的80%以上,是结直肠癌的“主力军”,它的发生发展是一个多基因、多步骤不断积累的过程,病因和发病机制尚未完全清楚。近年来,在散发性结直肠癌中随机发现的胚系突变被学者不断报道,这提示我们应多关注遗传因素在散发性结直肠癌发病机制中的作用,从新的视角来深入了解散发性结直肠癌的遗传基础。本课题利用二代测序技术检测散发性结直肠癌的基因突变,尤其对胚系突变的发生情况进行深入研究,为完善散发性结直肠癌的遗传易感性筛查及发病机制提供理论基础。通过比较发生胚系突变和未发生胚系突变患者的临床病理参数,评估胚系突变与散发性结直肠癌患者临床病理特征之间的关系。方法:收集2017年1月至2019年1月来自天津医科大学总医院的32例散发性结直肠癌患者的肿瘤组织和外周血进行DNA样本的提取。通过二代测序技术对DNA样本进行测序,测序数据经生物信息学分析后筛选出突变基因。根据基因检测结果,将患者分为胚系突变组和非胚系突变组,对两组患者的突变基因及突变个数进行比较。利用SPSS 25.0软件对两组患者的临床病理学参数进行统计分析,P<0.05认为差异具有统计学差异,P<0.01时认为差异显著。结果:1.本研究共筛选出2515个基因突变,分布在1590个基因中,其中突变频率较高的基因主要为:TP53、APC、KRAS、PIK3CA、AR、ATM、MUC4、TCF7L2、TMEM67、TTN、VKORC1、FBXW7。突变频率最高的基因为TP53基因(23/32),其次为APC基因(22/32)和KRAS基因(11/32),其中APC基因的突变类型主要为无义突变。错义突变类型为主的基因:TP53、KRAS、PIK3CA、ATM、MUC4、TTN。2.本研究纳入了32例散发性结直肠癌患者,其中发生胚系突变的患者11例,占全部患者的34.4%。这11例患者中共筛选出42个胚系突变,包括:78.6%的错义突变、14.3%的插入缺失和7.1%的无义突变。突变频率最高的基因为ATM基因(3/11),其次为AR、CYP2C19、IDH2、TGFBR2、UGT1A1基因(2/11)。除AR、CYP2C19、FANCD2、MSH6、MUTYH、SMAD4基因外,其他基因的突变类型均为错义突变。3.本研究筛选出的胚系突变中,81.0%(34/42)的突变在Clin Var、1000G或Ex AC数据库中有归档,66.7%(28/42)为致病性突变,这些致病性胚系突变的基因主要跟错配修复、碱基切除修复、核苷酸切除修复、范可尼贫血通路等通路密切有关。4.将胚系突变组(n=11)和非胚系突变组(n=21)两组患者的临床病理参数和基因突变情况进行统计学分析,发现胚系突变组患者的发病年龄明显低于非胚系突变组患者(49.45±17.52 vs.64.00±12.77,P=0.027),胚系突变组患者较非胚系突变组患者的肿瘤直径有增大的趋势(P=0.159)、基因突变个数有增多的趋势(P=0.120)。结论:1.本研究利用二代测序技术来筛选散发性结直肠癌相关的基因突变,证实了该方法的可靠性和可行性,为散发性结直肠癌的发病机制和遗传风险评估提供理论依据。2.本研究呈现了入组的散发性结直肠癌队列中基因突变的结果,34.4%的患者发生了胚系突变,81.0%的胚系突变在Clin Var、1000G或Ex AC数据库中有归档,66.7%的胚系突变为致病性突变,这提示我们应重视散发性结直肠癌中的胚系突变的存在及作用,我们还需深入研究来探讨这些致病性胚系突变在散发性结直肠癌发病机理的作用。3.我们还发现了一些新的胚系突变,扩展了散发性结直肠癌易感基因的胚系突变谱,有助于以后探讨与散发性结直肠癌相关的候选易感基因及少见的突变,对散发性结直肠癌患者的早期诊断、遗传咨询及临床表现前筛查具有重要的意义。4.临床病理资料显示,携带遗传易感基因胚系突变的散发性结直肠癌患者发病年龄更小,肿瘤直径有增大的趋势,基因突变个数有增多的趋势,这提示我们在临床中面对具有这些临床病理特征的散发性结直肠癌患者时,应尤其重视胚系突变的存在及肿瘤基因的筛查,为患者制定更完善的治疗方案、进行更严密的术后肿瘤监测、尽早警惕患其他肿瘤的风险,从而做好相应的早期预防工作。