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杀鱼爱德华氏菌（Edwardsiella piscicida）是威胁全球海水和淡水养殖业的重要致病菌。目前,其致病机制尚不清楚,一些新的致病因子还有待挖掘,而且该菌具有广谱的耐药性。因此,对杀鱼爱德华氏菌耐药性与致病性的研究是水产领域的一个重要课题。在对杀鱼爱德华氏菌展开的前期研究中,一个编码铁吸收调控因子的fur敲除株被发现。与野生株相比,该fur敲除株的毒力明显增强。随后的蛋白质组分析发现,一个YhaO同源蛋白（ETAE0413）的表达显著上升。为探究该YhaO同源蛋白是否与细菌的致病性相关,通过生物信息学分析发现,YhaO（丝氨酸透过酶,命名为YhaOEp）和YhaM（丝氨酸脱水酶,命名为YhaMEp）相邻,且共转录分析实验证实yhaOEp和yhaMEp组成双顺反子操纵子。已有的研究表明丝氨酸透过酶和脱水酶广泛存在于微生物中,主要参与氨基酸合成与转运,但它们的耐药性和致病性作用鲜有报道,尤其在水产病原菌中,它们在抵抗抗生素以及对宿主的致病性方面的作用几乎是完全未知的。因此,本论文致力于研究丝氨酸透过酶和脱水酶在杀鱼爱德华氏菌的抗生素抗性和致病性中发挥的功能。通过构建yhaOEp和yhaMEp的框内缺失突变株,且分别命名为TX01ΔyhaO和TXO1ΔyhaM,研究YhaO-YhaM的生物学作用。首先,检测了yhaOEp-yhaMEp在三种常见胁迫条件,即酸性条件（pH=5）、高温（42℃）和氧化条件（H202）下的表达情况。实验结果表明这两个基因在高温条件下的表达量上调约5倍,但在酸性和氧化条件下的表达量无显著变化。其次,比较分析了野生株TX01、敲除株TX01ΔyhaO和TX01ΔyhaM在抗逆性方面的差异。实验结果表明,与野生株TX01相比,TX01ΔyhaO和TX01ΔyhaM无论在正常条件下还是在铁缺失、氧化压力、酸性压力等逆境环境下,生长速度均无显著变化。随后,分析比较了三个菌株在抗生素抗性方面的功能,发现与野生株TX01相比,TX01ΔyhaO和TX01ΔyhaM显著降低了细菌对头孢唑啉、呋喃唑酮和复方新诺明的抗性。由于膜完整性与抗生素抗性紧密相关,我们紧接着分析比较了三个菌株的膜完整性情况。结果表明,与野生株TX01相比,yhaOEp的缺失显著破坏了杀鱼爱德华氏菌维持膜完整性的能力,而TX01ΔyhaM则无显著变化。回补株TXO1ΔyhaOC回复了由yhaOEp缺失导致的膜破损表型。最后,比较分析了三个菌株在生物膜形成能力方面的差异。结果表明,与野生株TX01相比,TX01ΔyhaO的生物膜形成能力降低,而TX01ΔyhaM的生物膜形成能力无显著变化。同样,回补株TX01ΔyhaOC回复了由yhaOp缺失导致的生物膜形成能力减弱这一表型。上述这些结果表明,YhaO-YhaM不涉及对缺铁压力、氧化压力、酸性压力等逆境条件的抵御,但参与细菌对头孢唑啉、呋喃唑酮和复方新诺明等抗生素的耐药性,而且YhaO-YhaM还是细菌维持膜完整性、形成生物膜等生理功能所必需的。由于细菌对抗生素的耐药性以及自身形成生物膜的能力均与致病性有关,因此推测,YhaO-YhaM很可能与细菌的致病性有关。为明确这点,进行了致病性实验。首先,在细胞水平上检测了三个菌株的致病性。体外感染宿主非吞噬细胞的实验表明,缺失yhaOEp的菌株对牙鲆FG细胞的黏附能力显著降低,但yhaMEp的缺失无显著变化;感染宿主吞噬细胞的实验表明,与野生株相比,TX01ΔyhaO在小鼠巨噬细胞RAW264.7内的侵染和增殖能力显著降低,但TX01ΔyhaM无显著差异。回补株TX01ΔyhaOC侵染FG细胞和小鼠巨噬细胞的能力与野生株相当。随后,用罗非鱼作为侵染对象进行了体内感染实验。结果表明,与野生株TX01相比,TX01ΔyhaO感染鱼的脾脏、肾脏的细菌数量显著降低;与细胞水平的实验结果不同的是,TX01ΔyhaM感染宿主组织的能力也显著降低。回补株TX01ΔyhaOC和TX01ΔyhaMC侵染宿主组织的能力均与野生株TX01无显著差异。上述结果表明,YhaO-YhaM在杀鱼爱德华氏菌的耐药性和致病性中起重要作用。接下来,对YhaOEp-YhaMEp的受调控机制进行了探究。在其它菌株如大肠杆菌中,YbaO蛋白对yhaO-yhaM操纵子的表达有直接的调控作用。在杀鱼爱德华氏菌中,通过序列分析发现注释为Lrp/AsnC家族转录调控因子的ETAE1001与大肠杆菌中的YbaO具有高同源性。因此,将ETAE1001命名为YbaOEp。首先,预测了yhaOEp-yhaMEp的启动子,在启动子的上、下游分别设计带FAM标记的YhaO-YhaMPFAMF/YhaO-YhaMPFAMR引物,经PCR扩增获得长度为521 bp的片段,并将其命名为P521。其次,体外表达并纯化了 YbaOEp蛋白。最后,进行了凝胶迟缓实验（EMSA）,没有获得含蛋白-探针复合物的条带。该实验结果初步表明,在杀鱼爱德华氏菌中,YbaO可能对yhaO-yhaM不存在直接的调控作用。综上所述,YhaO-YhaM在杀鱼爱德华氏菌的耐药性和致病性中扮演重要角色。这项研究为我们深入探讨丝氨酸透过酶YhaO和丝氨酸水解酶YhaM在杀鱼爱德华氏菌中的生物学活性提供了新的见解,并有助于进一步了解杀鱼爱德华氏菌的致病机理。