【摘 要】
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我们从云南邦拿掌温泉中分离得到一株高温厌氧纤维素分解菌邦2菌.经鉴定该菌属解糖热解纤维素菌属(Cadicellulo siruptor).我们以邦2菌为材料,制备其总DNA,经限制性核酸内切
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我们从云南邦拿掌温泉中分离得到一株高温厌氧纤维素分解菌邦2菌.经鉴定该菌属解糖热解纤维素菌属(Cadicellulo siruptor).我们以邦2菌为材料,制备其总DNA,经限制性核酸内切酶EcoRI部分酶切后,在T<,4>DNA连接酶的作用下与经EcoRI完全酶切、去磷酸化的质粒载体pUC18连接,然后转化E.coli JM109,建立了邦2的基因文库,经筛选鉴定得到6.3×10<3>个重组子;重组子经刚果红平板验证:约有23.5﹪菌落呈现透明圈;重组子经EcoRI酶切验证显示:重组质粒均含有外源DNA插入片段.结果表明已克隆到邦2菌纤维素酶系中的内切葡聚糖酶基因(ED基因)片段.邦2菌经质粒提取及琼脂糖凝胶电泳,未检测到质粒.37℃下热诱导ED基因在重组大肠杆菌中的表达,并对基因表达产物进行SDS-PAGE分析,结果显示,重组大肠杆菌总蛋白在约46kD处有新的蛋白带出现,符合ED基因序列表达产物大小.
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